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生物炭对猪粪堆肥过程中细菌群落结构的影响
黄家庆 叶菁 李艳春 林怡 刘岑薇 王义祥
堆肥化处理能有效利用农业有机废弃物,广泛应用在禽畜粪便的处理。生物炭是一种具备很强吸附能力的多功能材料,广泛应用于农业、工业和环境领域,在堆肥中合理添加生物炭能够加速堆肥化过程,提高堆肥的肥力。研究表明生物炭能够影响细菌的生长,但生物炭对猪粪堆肥细菌群落结构的影响尚未见报道。本实验通过在猪粪堆肥中混合不同比例的生物炭,利用高通量测序技术研究堆肥高温期和温度稳定期细菌群落结构的动态变化规律,同时分析堆肥细菌与环境因子的关系,为生物炭和猪粪堆肥的应用提供参考。
摘要
【背景】细菌群落多样性影响堆肥过程,生物炭影响细菌的生长,但生物炭对猪粪堆肥细菌群落结构的影响尚未见报道。
【目的】根据细菌群落结构和堆肥温度的变化规律,添加适量的生物炭到猪粪堆肥,以提高堆肥主要细菌的占比和堆肥效率,为推广生物炭和猪粪堆肥的联合应用提供参考。
【方法】设计0%、3%、6%和9%的生物炭添加量,在堆肥的高温期和温度稳定期分别取样,总共8个样品。根据Illumina MiSeq对细菌16S rRNA基因的高通量测序结果,分析生物炭添加量和堆肥温度对猪粪堆肥细菌群落结构的影响。
【结果】在细菌门水平上,猪粪堆肥主要的细菌有Proteobacteria、Actinobacteria、Bacteroidetes、Chloroflexi、Gemmatimonadetes、Firmicutes、Acidobacteria和Deinococcus-Thermus;在细菌属水平上,猪粪堆肥主要的细菌有Chryseolinea、Subgroup_6_norank、Steroidobacter、Anaerolineaceae、Nonomuraea、Longispora、Bacillus、Sporacetigenium、Luteimonas、Phyllobacteriaceae、Truepera、Rhodothermacea和Aquamicrobium。生物炭添加量对猪粪堆肥主要细菌的生长既有促进作用,也有抑制作用。随着生物炭添加量的增加,Bacillus、Streptomyces、Rhodothermaceae和Firmicutes的丰度随之增加,而Chryseolinea、Longispora和Steroidobacter的丰度却随之减少。Firmicutes、Bacillus和Streptomyces的丰度在堆肥高温期要大于堆肥温度稳定期,而Chloroflexi、Anaerolineaceae和Longispora则相反。猪粪堆肥高温期的细菌多样性要明显大于堆肥温度稳定期。堆肥高温期的细菌群落达到70个,远多于堆肥温度稳定期的15个;其中对猪粪堆肥起主要作用的细菌,堆肥高温期时达到7个(Rhizobiales、Incertae_Sedis、Proteobacteria、Alphaproteobacteria、Xanthomonadales、Gammaproteobacteria和Steroidobacter),而堆肥温度稳定期只有3个(Micromonosporales、Longispora和Micromonosporaceae)。猪粪堆肥添加生物碳后,环境因子(电导率、含水量、温度和pH)对堆肥主要的细菌不能产生显著的影响。β-Proteobacteria、Rhodothermaceae、Phyllobacteriaceae和Bacterium是含水量、温度和pH影响最大的细菌。
【结论】生物碳添加量和堆肥温度能改变猪粪堆肥的细菌群落结构,在猪粪堆肥高温期能显著增加细菌的数量和多样性。猪粪堆肥的电导率、含水率、温度和pH能影响堆肥细菌的生长,但对堆肥主要细菌的影响不显著。
图1 不同堆肥处理温度的变化
Figure 1 Changes of temperature in different composting treatments
图2 相似度为0.97条件下堆肥处理的OTU稀释曲线
Figure 2 The OTUs rarefaction curves of the composting treatments at cut off level of 3%
图3 不同处理中共有和独有OTU数目的Venn图
Figure 3 The venn diagram based on common or unique OTUs number in the different treatments
图4 基于相似性>97%的OTU水平上非度量多维度 分析
Figure 4 NMDS plot on OTUs level (similarity over 97%)
图5 不同样品微生物菌群基于门水平丰度的PCoA 分析
Figure 5 Principal co-ordinates analysis (PCoA) of microbial community based on phylum abundance among different samples
图6 细菌群落在属水平上的群落Heatmap图和聚类树分析
Figure 6 The community heatmap of bacteria at the genus level and clustering tree analysis
图7 各处理在门分类水平上细菌群落组成及其相对丰度
Figure 7 Composition and relative abundance of bacteria groups among different treatments at phylum level
图8 各处理在属分类水平上细菌群落组成及其相对丰度
Figure 8 Composition and relative abundance of bacteria groups among different treatments at genus level
图9 基于两种堆肥温度的微生物类群分析
Figure 9 Indicator microbial groups within the two types of compost temperature with LDA values higher than 4
图10 基于细菌种类组成的LEfSe分析
Figure 10 LEfSe analysis based on bacterial species composition
图11 Heatmap相关性分析
Figure 11 The heatmap correlationship analysis
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本期制作:赵彬涵
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