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大肠杆菌Small RNA EsrE的转录调控
宋洁 侯兵兵 叶江 吴海珍 张惠展
细菌Small RNAs(sRNA)作为转录后调控因子,在调控生物膜形成、耐药应激、营养利用等过程中发挥重要作用。该实验室前期研究发现大肠杆菌中的新型sRNA EsrE调控琥珀酸脱氢酶的表达并且影响细胞生长,并且证明EsrE的转录受控于独立的启动子。然而,EsrE转录相关的反式作用因子和调控机制尚不清晰。本研究通过双质粒报告系统筛选转录调控因子,并通过凝胶迁移实验和qRT-PCR研究方法验证转录调控因子。实验结果表明,σ因子RpoH可反式调控EsrE的转录
摘要
【背景】大肠杆菌中Small RNA EsrE调控琥珀酸脱氢酶的表达并影响细胞生长,对其调控机制的探究有利于加深EsrE对细胞生长影响的认识。
【目的】探究大肠杆菌Small RNA EsrE的转录调控机制。
【方法】通过双质粒报告系统筛选转录调控因子,并通过凝胶迁移实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)和qRT-PCR研究方法验证转录调控因子。
【结果】双质粒报告系统证明RNA聚合酶亚基σ32 (RpoH)上调PesrE,β-羟酰-ACP脱水酶(FabZ)下调PesrE。EMSA结果和体内实验显示RpoH结合PesrE片段,FabZ不结合PesrE片段。
【结论】RpoH直接结合启动子序列参与调控,FabZ以其他方式间接参与Small RNA EsrE的转录调控。
图1 EMSA所用探针PesrE和ORFesrE
Figure 1 Probes PesrE and ORFesrE used in EMAS
图2 esrE转录调控因子的验证
Figure 2 Identification of the transcriptional regulators of esrE
图3 FabZ和RpoH蛋白重组表达与纯化
Figure 3 Overexpression and purification of His6-FabZ and His6-RpoH
图4 EMSA验证FabZ和RpoH与PesrE的结合力
Figure 4 EMSAs assays of FabZ or RpoH with the PesrE probe
图5 体内实验验证RpoH调控PesrE
Figure 5 RpoH regulates PesrE in vivo
图6 PesrE序列中RpoH结合位点的分析
Figure 6 Analysis of the binding site of RpoH in PesrE
图7 多因素参与esrE转录调控的模式
Figure 7 Model of esrE transcriptional regulation by multiple factors
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微生物学通报
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本期制作:赵彬涵
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