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MicroRNA-200a-3p(miR-200a-3p)属于miR-200家族,位于染色体1p36上,在人类肿瘤中发挥重要作用,并调节细胞凋亡和增殖。有越来越多的证据表明,miR-200a-3p可能与AD病理有关。这篇发表在Frontiersin Pharmacology杂志的研究MicroRNA-200a-3pMediates Neuroprotection in Alzheimer-Related Deficits and AttenuatesAmyloid-Beta Overproduction and Tau Hyperphosphorylation via Coregulating BACE1 and PRKACB。探讨了microRNA-200a-3p(miR-200a-3p)在介导针对AD相关缺陷的神经保护中的作用和潜在的分子机制。
miR-200a-3p在AD病程中的表达降低
在AD患者血液中及另外三种AD模型的脑组织中——APP / PS1双转基因小鼠、APPswe细胞、快速衰老小鼠8(SAMP8),均观察到miR-200a-3p的表达水平呈显著下调趋势。这表明miR-200a-3p可能参与了AD病理过程的调节。
图1.miR-200a-3p的异常表达与AD的进展有关
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miR-200a-3p抑制Aβ1-42的产生,减弱Tau磷酸化并抑制细胞凋亡
通过向APPswe细胞中转染miR-200a-3p mimics,发现Aβ1-42的产生减少,tau蛋白在丝氨酸202/苏氨酸205(AT8),丝氨酸214(S214),丝氨酸396(S396)和丝氨酸356(S356)表位的磷酸化显着降低;并且,流式结果表明其早期凋亡、晚期凋亡和总凋亡的比率均显着降低。而在miR-200a -3p抑制剂转染的APPswe细胞中,Aβ1-42则过度产生,tau蛋白各位点的磷酸化均显著升高,细胞凋亡率显著增加。
图2.miR-200a-3p在APPswe细胞中表现出神经保护特性
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BACE1基因是miR-200A-3P的直接靶标
使用miRNA目标预测数据库TargetScan进行了计算分析,结果表明miR-200a-3p在BACE1 mRNA 的3'-UTR中具有潜在的靶位点。此外,使用双重荧光素酶报告基因测定来研究miR-200a-3p调节BACE1的方式。得出的结论是miR-200a-3p与BACE1的3'-UTR特异性结合。此外,由于miR-200a-3p模拟物或抑制剂未影响BACE1 mRNA 的表达,而显著影响了BACE1蛋白的表达,表明miR-200a-3p与BACE1的相互作用方式在于蛋白质翻译过程而非转录过程的调控。
图3.BACE1的mRNA是miR-200a-3p的直接靶标
PRKACB是miR-200a-3p的另一个靶标
生物信息学分析预测,miR-200a-3p的另一个候选靶标是PRKACB,其编码PKA的一个旁源催化亚基之一,从而通过Ser214,Ser356和Ser396表位增加磷酸化tau的水平。双荧光素酶报告实验结果表明miR-200a-3p与PRKACB之间的潜在相互作用。并且,miR-200a-3p模拟物显着下调了PRKACB的mRNA和蛋白质表达。
图4. PRKACB是miR-200a-3p的另一个靶标
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miR-200a-3p通过调节BACE1和PRKACB发挥神经保护作用
将BACE1或PRKACB与miR-200a-3pmimics(或NCM)共转染到APPswe细胞中。BACE1或PRKACB与NCM的共转染增加了APPswe细胞的早凋、晚凋和总凋亡率以及caspase-3的活性;而miR-200a-3p模拟剂可抑制BACE1或PRKACB引起的APPswe细胞凋亡、Aβ1-42增加以及tau蛋白磷酸化水平,发挥神经保护作用。
此外,当使用BACE1 siRNA和PRKACB siRNA沉默BACE1和PRKACB时,在APPswe细胞中发现miR-200a-3p神经保护的作用减弱(补充材料)。这些结果表明,miR-200a-3p可能通过在体外协同调节BACE1和PRKACB来保护神经细胞。
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总 结
本研究表明了miR-200A-3P与AD病程进展密切相关,并且通过两种可能的机制发挥针对Aβ毒性的神经保护作用:第一,通过抑制BACE1的表达直接或间接地抑制Aβ过度产生;第二,通过同时降低PKA的表达来降低tau蛋白的过度磷酸化。当然,miR-200a-3p调控轴相关的其它潜在机制仍需进一步探讨。此外,通过适当的新型载体将miR-200a-3p局部递送到某些大脑区域,例如皮层和海马体,也可能为AD的miRNA疗法提供新指示。
图6. miR-200a-3p在APPswe细胞中神经保护作用的示意图
校审: Victoria、Simon (Brainnews编辑部)
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