武汉大学张先正团队 ACS Nano: 酶驱动嵌合肽靶向细胞膜用于增强肿瘤的光动力免疫治疗

图一、靶向细胞膜（PM）的PDT（PM-PDT）结合PD-1检查点阻断疗法根除原发肿瘤并抑制远端肿瘤的示意图

图二、PCPK和PCPK-SR纳米颗粒的表征

（A-B）PCPK和PCPK-SR的分子结构及其嵌合肽纳米粒子的自组装过程；

（C-D）PCPK和PCPK-SR纳米粒子的TEM图像；

（E-F）PCPK和PCPK-SR纳米颗粒在水溶液中的粒径分布；

（G）在DMF溶液中PpIX和在PBS中PCPK-SR和PCPK的UV-vis吸收光谱；

（H）通过检测530 nm处DCF的荧光强度来测定660 nm光照射下PBS、PCPK-SR、PCPK和PCPK与维生素C的ROS生成效率；

（I）有无660 nm光照射下，利用ROS敏感的荧光探针DCFH检测PCPK和PCPK-SR的4T1细胞中细胞内ROS产生量。

图三、研究PCPK和PCPK-SR的细胞PM靶向和滞留

（A）PCPK在细胞内的法尼基化过程和PM靶向作用的示意图；

（B）PCPK-SR无法进行细胞内法尼基化过程和PM靶向作用的示意图；

（C-D）PCPK和PCPK-SR与4T1细胞共培养后的荧光图像和相应的荧光强度分布图；

（E-F）4T1细胞与PCPK和PCPK-SR共培养8 h并替换为新鲜培养基后，在不同时间点通过共聚焦显微镜观测细胞内荧光的示意图；

（G-H）在不同时间点替换新鲜培养基后，用PCPK和PCPK-SR处理的4T1细胞的荧光图像和相应的荧光强度分布图。

图四、体外细胞毒性和PM损伤评估

（A）用MMT法测定PCPK和PCPK-SR有无光照下的细胞毒性；

（B）通过MDA法测定对4T1细胞进行多种处理后的脂质过氧化程度；

（C-D）细胞的活/死染色和台盼蓝染色；

（E-F）凋亡坏死染色。

图五、4T1细胞免疫激活研究

（A-B）通过ELISA和ATP试剂盒检测细胞上清液中的HMGB-1和ATP的含量；

（C-D）小鼠血清中的IL-6和TNF-α检测；

（E）体内DC成熟检测；

（F）体内成熟DC的定量分析；

（G）肿瘤阻止HMGB1免疫荧光染色。

图六、4T1荷瘤小鼠的体内抗肿瘤研究

（A）PCPK介导的PM-PDT联合抗PD-1免疫疗法抑制原位瘤和远端瘤的示意图；

（B-C）在2周评估期内采用不同治疗方法后，原位瘤和远端瘤的相对肿瘤体积；

（D）在2周评估期内4T1荷瘤小鼠的体重；

（E）治疗后第14天的原位瘤和远端瘤的肿瘤图像；

（F-G）原位瘤和远端瘤的H＆E和TUNEL染色图像。

图七、体内免疫激活研究

（A）4T1荷瘤小鼠远端瘤的肿瘤浸润性T淋巴细胞的检测；

（B）4T1荷瘤小鼠远端瘤的肿瘤浸润性T淋巴细胞的定量分析；

（C）4T1荷瘤小鼠远端瘤组织颗粒酶B免疫荧光染色；

（D）红色荧光颗粒酶B的MFI值。