利用马铃薯X病毒实现了非间隔sgRNA序列靶向的高效CRISPR多重编辑

科技工作者之家 2021-01-25

来源:植物生物学

在植物中,大多数CRISPR‐Cas策略依靠农杆菌的遗传转化来实现基因的导入,如Cas核酸酶或合成引导RNA (sgRNA)。Cas核酸酶是编辑方法中的常量元素,而sgrna是目标特异性的,通常需要筛选过程来识别那些最有效的。由于病毒具有基因组扩增和系统运动的能力,植物病毒源载体是将sgRNAs快速高效导入成体植物的另一种选择,这种策略被称为病毒诱导基因组编辑(virus - induced genome editing, VIGE)。
本研究,利用马铃薯X病毒(PVX)构建了一个在茄科植物成体中容易表达多种sgRNAs的载体。利用PVX‐为基础的载体,本氏烟草基因被有效靶向,在组成性表达脓性链球菌Cas9的转化株系中产生近80%的indels。有趣的是,结果表明PVX载体允许非间隔sgRNAs阵列的表达,在成体植物组织中在几天内实现高效的多重编辑。此外,从受感染组织或受感染植物种子再生的植株中可以获得无病毒编辑的子代,这些子代表现出高比率的遗传双等位基因突变。

总之,这种新的PVX载体可以方便、快速、高效地表达sgRNAs阵列,用于多种CRISPR‐Cas基因组编辑,将成为一种有用的工具,用于功能基因分析和跨多种植物物种的精确育种,特别是在茄科作物中。

来源:PlantBiotech 植物生物学

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