Nature Plants| 揭示植物特异识别并沉默活跃转座子的新机制
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转座子(TEs, transposons)是基因组中的可移动遗传元件,对基因组进化和物种多样性具有重要作用。但其转座也会对宿主发育造成威胁,为此宿主进化出了多种多样的机制来抑制其活性 。在植物中,除了由Pol IV和Pol V 介导的RNA指导的DNA甲基化(RdDM)经典途径来维持转座子沉默,还存在另一条由RDR6介导的非经典RdDM途径,对重新激活或外源转移的转座子从头甲基化具有重要作用【1】。
转座子造成的玉米表型多样性(作者供图)
2021年3月2日,中国科学院分子植物科学卓越创新中心,中国科学院-英国约翰英纳斯中心植物和微生物科学联合研究中心Jungnam Cho研究组在
Nature Plants
发表了题为
Ribosome stalling and SGS3 phase separation prime the epigenetic silencing of transposons
的研究论文,揭示了植物中翻译耦联和SGS3液-液相分离介导活跃转座子沉默的机制。
有研究表明转座子较低的CpG密度【2】和GC3含量【3】(密码子第三位核苷酸G和C的含量)与siRNA产生和活跃的DNA甲基化相关,暗示翻译耦联途径可能参与表观遗传沉默。值得注意的是,低翻译效率可导致RNA截短,而截短的RNA是RDR6靶向的必要前提【4,5】。此外,由核糖体停滞诱发的RNA监控途径No-Go RNA降解(NGD)在植物中会造成RNA截短,且在果蝇中被报道能抑制转座子活性。由此研究人员提出假设:转座子RNA可由于其低效的翻译导致自身更容易被切割(RNA cleavage)。
奔跑的转座子,帽子:组蛋白等修饰;me:甲基化修饰(作者供图)
研究人员分析了水稻大量转座子被激活的愈伤组织翻译组数据,并对拟南芥ddm1突变体进行核糖体印记测序(Ribo-seq),发现转座子翻译效率相对于基因明显下降。那么这种低翻译效率是否由于第三位密码子GC3含量低、含有更多的非最优翻译密码子造成的呢?烟草瞬时表达荧光素酶实验证实了的确如此。进一步地,拟南芥ddm1降解组(Degradome-seq)数据表明,翻译效率与RNA截短产生easiRNA水平紧密相关。核糖体测序数据也发现双核糖体片段(disome,用于表征核糖体停滞或碰撞)中含有更多的转座子转录本,且这些disome片段翻译潜能低,易被截短和降解产生easiRNA。上述结果表明核糖体停滞与活跃的RNA截短、easiRNA产生紧密相关,但RDR6如何特异识别转座子RNA并产生easiRNA的仍不清楚。
为了进一步探索,研究人员注意到,RDR6介导的途径在空间上局限在胞质siRNA 小体,而RDR6互作蛋白SGS3在其两端均含有朊病毒样结构域(PrLD),其具有介导蛋白发生液-液相分离 (liquid-liquid phase separation, LLPS) 的潜力。进而在烟草中表达SGS3全长及PrLD截短的SGS3蛋白,研究人员发现全长SGS3蛋白能够聚集形成胞质集合体(cytoplasmic foci),而PrLD截短的版本却只能局限在细胞核。体外实验也显示全长SGS3蛋白能够聚集形成液滴状结构,而PrLD截短版本无法观察到(图3)。SGS3相分离具体发挥怎样的作用?研究人员进一步在烟草中将SGS3与RDR6共表达,结果表明只有当全长SGS3存在时,RDR6才能够与其共定位形成胞质集合体。由此可见,SGS3蛋白的液-液相分离对于胞质siRNA 小体的形成至关重要。
共聚焦显微镜下SGS3蛋白体外相分离形成的液滴状结构(作者供图)
已知siRNA小体能够与应激颗粒(stress granule, SGs)共定位,经证明应激颗粒关键组分UBP1b也能够发生液-液相分离。酵母及人类的研究表明SG转录组与翻译抑制相关,那么不难想到,转座子RNA是否更易定位在包含应激颗粒及siRNA小体的RNA颗粒(RNA granules, RGs)中,从而被RDR6-RdDM途径选择性靶向?为了回答这一问题,研究人员在拟南芥ddm1突变体中富集RG组分并开展了RNA测序,数据表明RG富集的RNA中转座子比例明显升高。
植物转座子 RNA由于含有非最优密码子导致翻译过程中出现常见的核糖体停滞,核糖体停滞诱发RNA截短并由SGS3液-液相分离介导定位至胞质siRNA小体
转座子的特异识别和easiRNA产生的通路对基因组完整性的永久保持至关重要,至此该研究展现了植物活跃转座子 RNA由于含有非最优密码子导致翻译过程中出现常见的核糖体停滞,进而诱发RNA截短并由SGS3液-液相分离介导定位至胞质siRNA小体沉默的全过程。
值得注意的是,SGS3和RDR6共同作用除介导活跃转座子RNA沉默外,早已知在病毒RNA、外源基因识别中同样发挥作用,但SGS3介导的液-液相分离尚属首次发现 。
中国科学院分子植物科学卓越创新中心
Jungnam Cho
研究员为论文通讯作者。中国科学院分子植物科学卓越创新中心
Eunyu Kim
副研究员和博士生
王令、雷震
为论文共同第一作者,博士生
李慧
和
范文文
参与了本项目。该研究得到了国家自然科学基金委员会和中国科学院战略先导B项目的资助。
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