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微生物学通报

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肠炎沙门氏菌ssrAB、hilA、hilD基因缺失菌株的构建及其生物学特性

唐正露曹堃张丽韩敏敏罗聪玉李郁

沙门氏菌(Salmonella)是一种重要的人畜共患病原菌，目前传统抗生素疗法在预防和治疗沙门氏菌病中效果不佳，而疫苗免疫对预防和治疗沙门氏菌感染更加安全有效，其中沙门氏菌基因工程减毒活疫苗抗原性良好、风险性较低，已成为预防沙门氏菌病的重要手段。沙门氏菌的致病作用与其毒力岛(Salmonella Pathogenicity Island，SPI)基因的表达密切相关，然而相关基因在沙门氏菌感染过程中的作用机制研究尚不深入，基因缺失菌株的生物学特性及其对小鼠致病力的研究也未见报道。本研究以肠炎沙门氏菌G9菌株为研究对象，通过构建基因缺失株并对其生物学特性进行研究，为沙门氏菌基因工程减毒活疫苗或载体的研制奠定了基础。

摘要

【背景】沙门氏菌(Salmonella)是重要的人畜共患病原菌，由于耐药菌株的不断出现，新型防治方法的研究迫在眉睫。

【目的】探究ssrAB、hilA、hilD基因对肠炎沙门氏菌致病作用的影响，筛选安全可靠的沙门氏菌减毒活疫苗或载体用菌株。

【方法】采用自杀性质粒介导的同源重组技术，分别构建ssrAB、hilA、hilD单基因缺失株(ΔssrAB、ΔhilA、ΔhilD)、双基因缺失株(ΔssrABhilA、ΔssrABhilD、ΔhilAhilD)和三基因缺失株(ΔssrABhilAhilD)，并比较上述缺失菌株与亲本菌株间生物学特性的差异。

【结果】基因缺失后菌株的生长速率无显著变化(P>0.05)；除ΔhilD生物膜形成能力最强外，其他基因缺失菌株生物膜形成能力变化不显著(P>0.05)；ΔssrABhilAhilD和ΔssrABhilA的LD50值最高，ΔssrAB、ΔhilA、ΔhilD次之；亲本菌株引起的小鼠十二指肠的病变程度较所有缺失菌株明显严重；在所有缺失菌株中，ΔssrABhilAhilD对HeLa细胞的黏附力最低，ΔhilD在小鼠体内的定殖率最高；而机体分泌IL-1、IL-18、IFN-γ的能力与沙门氏菌ssrAB、hilA、hilD基因无显著相关性(P>0.05)。