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科技工作者之家 2020-02-01
来源:BioArt植物
原标题:aBIOTECH: 杨亦农团队发表CRISPR/Cas基因编辑系统中gRNA表达策略综述文章
CRISPR/Cas基因编辑技术因其精准、高效、低成本等优点已成为基因工程的强有力工具,在疾病治疗、作物遗传改良等方面发挥着重要作用。gRNA在CRISPR/Cas系统中起向导作用,引导Cas核酸酶靶向目标位点,gRNA的表达水平与基因编辑效率密切相关。
近日,宾夕法尼亚州立大学杨亦农(Yinong Yang)教授团队在aBIOTECH期刊在线发表题为“Efficient expression of multiple guide RNAs for CRISPR/Cas genome editing”的综述,总结了CRISPR/Cas基因编辑技术中引导RNA (gRNA) 的表达策略,介绍了多重基因编辑中同时表达多个引导RNA的方法和技巧,为CRISPR/Cas技术的开发和应用提供了参考。
文章总结了高效表达gRNA和Cas核酸酶的基本策略:一是传统的方法,用不同的启动子驱动Cas核酸酶和gRNA的表达,通常由Pol III型启动子驱动gRNA表达,Pol II型启动子驱动Cas核酸酶表达。二是一个启动子驱动单个转录单元同时表达gRNA和Cas核酸酶的方法,该方法可以最小化CRISPR表达载体,同时也有利于控制gRNA和Cas核酸酶协同表达。
文章重点介绍并比较了同时表达多个gRNA的方法;总结了核酶、tRNA加工系统、Csy4等不同策略用于CRISPR/Cas多重基因编辑的原理和方法;讨论了基因编辑技术中一些实用的技术,包括如何借助诱导型、时空特异型启动子表达gRNA;如何改造gRNA,提高其稳定性及编辑特异性和效率;如何优化CRISPR递送系统等。为不同物种中进行CRISPR/Cas多重基因编辑提供了参考。
作者简介
杨亦农,美国宾夕法尼亚州立大学教授。主要从事水稻抗病和抗逆机理、基因组编辑技术、农作物和真菌的精准遗传改良等方面研究。现任期刊aBIOTECH编委。
论文链接:
https://doi.org/10.1007/s42994-019-00014-w
来源:bioartplants BioArt植物
原文链接:http://mp.weixin.qq.com/s?__biz=MzU3ODY3MDM0NA==&mid=2247493836&idx=3&sn=2b62c75011655ee7e1160b3a4ad16231&chksm=fd7372abca04fbbd399b182bb7fd73348fc439703e33ea260deb4f9c466dc086e7143df17db1&scene=27#wechat_redirect
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