• 鹿茸胶原的分离纯化制备方法

    • 摘要:

      本发明涉及一种分离提取鹿茸胶原的方法,具体步骤是将鹿茸用Tris-HCl缓冲液匀浆液浸提后,离心,沉淀用Tris-HCl缓冲液洗净,加HOAc-NaOAc缓冲液,搅拌,浸提,离心,沉淀用Tris-HCl缓冲液洗净,加70%乙醇4℃浸提48h,60℃回流提取48h后,旋转蒸发回收乙醇,提取液置于截流分子量范围8~15kDa的透析袋中,对蒸馏水透析24h,-20℃预冻24h,冻干,即得含量约为70%的鹿茸胶原.本发明的鹿茸胶原的提取工艺较已有的胶原提取方法,简便,易行,活性实验表明,鹿茸胶原具有促进细胞生长的作用,仍然保持有生物活性.证明我们的提取方法没有破坏胶原的天然构象.

    • 专利类型:

      发明专利

    • 申请/专利号:

      CN200710193541.0

    • 申请日期:

      2007.12.12

    • 公开/公告号:

      CN101182358

    • 公开/公告日:

      2008-05-21

    • 发明人:

      赵雨 李银清 惠歌 李红艳 张巍

    • 申请人:

      长春中医药大学

    • 主分类号:

      C07K14/78(2006.01)I,C,C07,C07K,C07K14

    • 分类号:

      C07K14/78(2006.01)I,C07K1/30(2006.01)I,C,C07,C07K,C07K14,C07K1,C07K14/78,C07K1/30

    • 主权项:

      1、鹿茸胶原的分离纯化制备方法,其步骤如下:①去除水溶性蛋白:高速组织捣碎机匀浆鹿茸,加匀浆液体积1.5~2倍的含1~3mM β-巯基乙醇和1~3mM EDTA的15~25mM pH7.5~8.3的Tris-HCl缓冲液或pH7.5~8.3的NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液,搅拌、浸提、离心得上清液和沉淀,沉淀再加其体积1~1.5倍的上述缓冲液,搅拌,浸提、离心得去除水溶性蛋白的除杂沉淀;②胶原的提取:取上述步骤获得的除杂沉淀洗净,再加沉淀体积1~1.5倍的含1~3mM β-巯基乙醇和1~3mM EDTA的20~30mM pH3.1~3.5HOAc-NaOAc缓冲液,搅拌,1~4℃浸提48~72h,4000~5000rpm离心30~50min,弃上清;沉淀洗净后加沉淀体积1.5~2倍体积的65%~70%乙醇0~4℃浸提36~48h,60~65℃回流提取48~72h;③回收乙醇:50~55℃、60~65rpm旋转蒸发回收乙醇,提取液经透析、预冻、冻干后即得鹿茸胶原.