一种制备共固定化葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶微球的方法

• 摘要：

  一种制备共固定化葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶微球的方法,属于固定化酶技术领域.本发明以壳聚糖-精氨酸阴离子微球为载体,加入GOD和CAT混合溶液及戊二醛,经交联反应、过滤、洗涤、冷冻干燥,制备出共固定化GOD和CAT微球.本发明具有方法反应条件温和,酶活力回收较高,固定化酶半衰期长,操作简单,成本较低,清洁安全等特点.采用本发明方法制备出的产品,可广泛应用于医药、食品,水处理、水泥等行业中.还能作为除葡萄糖、脱氧、杀菌剂、葡萄糖定量分析试剂等.

• 专利类型：

  发明专利

• 申请/专利号：

  CN201110084111.1

• 申请日期：

  2011.04.02

• 公开/公告号：

  CN102199592A

• 公开/公告日：

  2011-09-28

• 发明人：

  周小华 王颖利 康宏宽 付雪梅 周兴

• 申请人：

  重庆大学

• 主分类号：

  C12N11/18(2006.01)I,C,C12,C12N,C12N11

• 分类号：

  C12N11/18(2006.01)I,C12N11/10(2006.01)I,C,C12,C12N,C12N11,C12N11/18,C12N11/10

• 主权项：

  一种制备共固定化葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶微球的方法,其特征在于具体方法步骤如下:(1)制备壳聚糖?精氨酸阴离子微球依据《应用化学》2009年7月第26卷第7期公开的"壳聚糖?精氨酸树脂固定化胰凝乳蛋白酶及其性质"一文,制备出壳聚糖?精氨酸阴离子微球;(2)配制GOD和CAT混合溶液第(1)步完成后,按照GOD∶CAT的活力比为1∶1~6的比例,将GOD和CAT溶解于pH?3~8的0.2mol/L磷酸氢二钠?柠檬酸缓冲溶液中,收集含GOD和CAT的溶解液;(3)GOD和CAT共固定化第(2)步完成后,按照第(1)步制备出的壳聚糖?精氨酸阴离子微球的质量∶第(2)步收集的含GOD和CAT的混合溶液的体积比为1g∶3~8mL的比例,先将壳聚糖?精氨酸阴离子微球分散于含GOD和CAT的混合溶液中,搅拌吸附30~60分钟后,再按照戊二醛体积浓度为2.5％的戊二醛溶液∶含GOD和CAT的混合溶液的体积比为1∶5~10的比例,将戊二醛溶液加入分散液中,在4~10℃下,反应2~3小时,用于GOD和CAT的共固定化,收集反应液;(4)制备共固定化GOD/CAT微球第(3)步完成后,将第(3)步收集的反应液,进行过滤,弃滤液,收集滤渣,对于收集的滤渣,用pH?3~8的0.2mol/L磷酸氢二钠?柠檬酸缓冲溶液液洗涤3~5次,分别收集洗涤液和洗涤渣,对于收集的洗涤渣,在温度为?40~?50℃、真空度为20~50Pa的条件下,进行冷冻干燥24~30小时,就制备出壳聚糖?精氨酸树脂共固定化GOD/CAT微球.