一种制备固定化腈水解酶的方法

• 摘要：

  一种制备固定化腈水解酶的方法,属于固定化酶技术领域.本发明以市售腈水解酶为原料,市售赖氨酸-大孔离子交换树脂为载体,经固定、抽滤、洗涤的简单工艺制得成品.本发明方法简单易行,反应条件温和,设备简单易得,无"三废"排放,充分利用物质资源,生产成本低,便于推广应用;本产品空间位阻效应小,热稳定性高,使用范围广,使用寿命长.本发明可广泛应用于制备固定化酶,采用本发明方法制备出的产品,可广泛应用于生物降解、生物修复、医药、化工、农业等行业中.

• 专利类型：

  发明专利

• 申请/专利号：

  CN201110414276.0

• 申请日期：

  2011.12.13

• 公开/公告号：

  CN102517274A

• 公开/公告日：

  2012-06-27

• 发明人：

  周小华 张杰 康宏宽 王丹 徐溢 王颖利

• 申请人：

  重庆大学

• 主分类号：

  C12N11/08(2006.01)I,C,C12,C12N,C12N11

• 分类号：

  C12N11/08(2006.01)I,C,C12,C12N,C12N11,C12N11/08

• 主权项：

  一种制备固定化腈水解酶的方法,其特征在于所述方法的具体步骤如下:(1)腈水解酶的预处理以市售腈水解酶为原料,按照市售腈水解酶的质量∶缓冲溶液的体积比为1g∶8~10mL的比例,将市售腈水解酶加入到缓冲溶液中,搅拌溶解30~40分钟后再泵入抽滤机中,进行抽滤,分别收集抽滤液和抽滤渣,其中,所述的缓冲溶液为pH值为8~11的pH?8.0的硼砂?氯化钙缓冲溶液或pH?9.0的硼砂?氯化钾缓冲溶液或pH?10.8的硼砂?碳酸钙缓冲溶液;(2)制备固定化腈水解酶粗品第(1)步完成后,按照市售赖氨酸?大孔离子交换树脂载体的质量∶第(1)步的收集抽滤液的体积∶戊二醛质量浓度为25％的戊二醛溶液的体积比为1g∶2~3mL∶0.5~0.8mL的比例,先将赖氨酸?大孔离子交换树脂载体加入缓冲溶液中,浸泡2~3小时,再加入第(1)步收集抽滤液和戊二醛溶液,搅拌均匀后,升温至30~45℃,恒温反应6~7小时,进行固定化酶反应,反应完成后通过抽滤机进行抽滤,分别收集抽滤渣和抽滤液,其中,所述的缓冲溶液为pH值为8~11的pH?8.0的硼砂?氯化钙缓冲溶液或pH?9.0的硼砂?氯化钾缓冲溶液或pH?10.8的硼砂?碳酸钙缓冲溶液;(3)制备固定化腈水解酶第(2)步完成后,将第(2)步收集的抽滤渣,按照抽滤渣的质量∶蒸馏水的体积之比为1g∶4~5mL的比例,用蒸馏水对抽滤渣进行洗涤,分别收集洗涤渣和洗涤液,对于收集的洗涤渣,即为制备出的固定化腈水解酶,放置于4~6℃下保存;(4)再生处理第(3)步完成后,将第(2)步收集的抽滤液,泵入截留分子量为1000~5000Da的纳滤器中,在压力为0.1~0.4MPa的条件下,进行纳滤,直至纳滤截留液体积减少至原体积的10~30％时止,分别收集纳滤滤过液和纳滤截留液.