• 无CO2条件下诱导间充质干细胞分化成骨细胞的培养方法

    • 摘要:

      本发明提供了一种无CO2条件下诱导间充质干细胞分化为成骨细胞的培养方法,所述方法包括:将第3代的人骨髓间充质干细胞,在5%CO2、37℃条件下培养过夜;待细胞完全贴壁并生长到大约80%融合时,更换诱导培养基,在无CO2、37℃条件下培养14~21天,获得成骨细胞;所述诱导培养基由基础培养基添加胎牛血清、青霉素、链霉素、地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C制成,所述基础培养基按如下终浓度组成配制:碳酸氢钠0.41g/L;十二水合磷酸氢二钠1.5g/L;磷酸二氢钾0.07g/L;氯化钠8.17g/L;溶剂为不含碳酸氢钠的L-DMEM细胞培养基.使用本发明提供的新型培养基配方,能正常诱导间充质干细胞成骨分化,且分化效果良好,既节省了设备耗费,又适用于无CO2条件下的细胞培养和诱导分化研究.

    • 专利类型:

      发明专利

    • 申请/专利号:

      CN201210025449.4

    • 申请日期:

      2012.02.07

    • 公开/公告号:

      CN102586181A

    • 公开/公告日:

      2012-07-18

    • 发明人:

      王金福 陈键

    • 申请人:

      浙江大学

    • 主分类号:

      C12N5/077(2010.01)I,C,C12,C12N,C12N5

    • 分类号:

      C12N5/077(2010.01)I,C,C12,C12N,C12N5,C12N5/077

    • 主权项:

      一种无CO2条件下诱导间充质干细胞分化为成骨细胞的培养方法,所述方法包括:(1)收集培养至第3代的人骨髓间充质干细胞,用含10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的α?MEM培养液调节细胞密度至1*105个/ml,制备得到细胞悬液;(2)将步骤(1)细胞悬液以0.5ml/孔接种至24孔板中,5%CO2、37℃条件下培养过夜;(3)待细胞完全贴壁并生长到80%融合时,更换诱导培养基,在无CO2、37℃条件下培养14~21天,获得成骨细胞;所述诱导培养基由基础培养基添加胎牛血清、青霉素、链霉素、地塞米松、β?甘油磷酸钠和维生素C制成,所述基础培养基按如下终浓度组成配制:碳酸氢钠0.41g/L;十二水合磷酸氢二钠1.5g/L;磷酸二氢钾0.07g/L;氯化钠8.17g/L;溶剂为不含碳酸氢钠的L?DMEM细胞培养基.