核酸酶放大的高灵敏电化学免疫分析方法

• 摘要：

  本发明涉及一种核酸酶放大的高灵敏电化学免疫分析方法.通过Au-S键合作用,在金电极表面自组装亚甲基蓝(MB)标记的发夹DNA,构成电化学免疫传感界面.以Mg²⁺、DNA1-抗体1、DNA2-抗体2、DNA3-抗体3的混合溶液为检测液,在目标蛋白质存在时,抗体1、抗体2、抗体3同时识别目标蛋白质形成免疫复合物,使得DNA1、DNA2与DNA3相互靠近进行邻位杂交,形成Mg²⁺依赖性核酸酶,进而催化裂解传感界面上的发夹DNA,导致MB脱离电极表面,氧化电流减小.通过检测MB电流的变化,实现对目标蛋白质浓度的测定.该免疫分析方法利用三个DNA-抗体偶合物邻位形成核酸酶放大检测信号,提高了检测灵敏度和选择性,同时可对目标蛋白质进行快速、一步化检测,具有很好的临床应用价值.

• 专利类型：

  发明专利

• 申请/专利号：

  CN201410623931.7

• 申请日期：

  2014.11.05

• 公开/公告号：

  CN104328192A

• 公开/公告日：

  2015-02-04

• 发明人：

  鞠熀先 严枫 任克维 吴洁

• 申请人：

  南京大学%江苏省肿瘤医院

• 主分类号：

  C12Q1/68(2006.01)I,C,C12,C12Q,C12Q1

• 分类号：

  C12Q1/68(2006.01)I,C12Q1/44(2006.01)I,C,C12,C12Q,C12Q1,C12Q1/68,C12Q1/44

• 主权项：

  本发明涉及一种核酸酶放大的高灵敏电化学免疫分析方法.其特征在于该分析方法以表面自组装亚甲基蓝(MB)标记的发夹DNA的金电极为电化学免疫传感界面和含有Mg²⁺、DNA1‑抗体1、DNA2‑抗体2、DNA3‑抗体3的混合溶液为检测液,在目标蛋白质存在时,抗体1、抗体2、抗体3同时识别目标蛋白质形成免疫复合物,使得DNA1、DNA2与DNA3相互靠近进行邻位杂交,形成Mg²⁺依赖性核酸酶,进而催化裂解电极表面的发夹DNA,导致MB的脱离及其氧化电流的减小,最后通过检测MB的氧化电流变化实现目标蛋白质的浓度测定.