蛋白质N末端肽段的在线分离装置及使用方法

• 摘要：

  本发明属于生物分析和检测技术领域,具体为一种蛋白质N末端肽段的在线分离装置及使用方法.该装置包括:两台高压泵、六通阀、四通阀、三通阀、C18柱和巯基肽段捕集柱以及相关连接部件.本发明中,蛋白质固定于填充C18疏水性填料的毛细管柱中,进而进行柱上氨基封闭,柱上酶解,酶解肽段固相巯基衍生,巯基肽段捕集柱捕集非N末端肽段,实现N末端肽段的在线分离.固相的蛋白封闭反应可以减少除盐过程中的损失,简化实验步骤,缩短样品反应时间;同时,可以通过采用过量的衍生试剂,实现肽段高效快速的巯基衍生.本发明通过在线装置,使得反应时间缩短,减少样品转移,减少样品损失,缩短除盐等预处理步骤的耗时,提高蛋白质N末端肽段鉴定效果.

• 专利类型：

  发明专利

• 申请/专利号：

  CN201610491898.6

• 申请日期：

  2016.06.29

• 公开/公告号：

  CN106198817A

• 公开/公告日：

  2016-12-07

• 发明人：

  张祥民 李兰婷 王轩堂

• 申请人：

  复旦大学

• 主分类号：

  G01N30/06(2006.01)I,G,G01,G01N,G01N30

• 分类号：

  G01N30/06(2006.01)I,G,G01,G01N,G01N30,G01N30/06

• 主权项：

   一种蛋白质N末端肽段的在线分离装置,其特征在于,包括:两台高压泵、一个六通阀、一个四通阀、一个三通阀、一个C18柱和一个巯基肽段捕集柱以及相关连接部件;其中,六通阀有6个接口,第一高压泵和六通阀的6号口相连,六通阀的3号口为进样口,进样环连接于六通阀的1号口和4号口之间,C18柱连接于六通阀的5号口和四通阀的2号口之间,六通阀的3号口和四通阀的1号口连接废液瓶子,第二高压泵、四通阀的3号口和巯基肽段捕集柱用三通阀相连;其中,第一高压泵有A、B、C和D共4个相位,分别对应于A、B、C和D 4个相:A相为去离子水;B相为氨基封闭试剂,由甲醛和氰基硼氢化钠配制而成,甲醛浓度为0.2‑3 M,氰基硼氢化钠浓度为0.1‑1.5 M;C相为三乙基碳酸氢铵溶液,浓度为20 mM‑1 M;D相为含0.1%三氟乙酸的乙腈.