一种有机整体小柱的制备及有机整体小柱和应用

• 摘要：

  本发明涉及一种Ti(IV)‑IMAC有机整体小柱的制备,并将其用于微量生物样品的磷酸化蛋白质组学分析.该有机整体柱材料是聚甲基丙烯酸酯类高聚物,含有丰富的孔结构,比表面积高,钛离子的富集活性位点多;与此同时,由于其亲水性的材料表面,在磷酸肽富集方面展现出了强大的富集能力.将其用于5g HeLa细胞的磷酸化蛋白质组学分析,平均鉴定到了超过1000个以上的非冗余磷酸化位点,且富集特异性高达92.5％.更重要的是,该Ti(IV)‑IMAC有机整体小柱制备简单,相比较填充小柱,它可以通过光诱导的自由基聚合反应仅需数分钟就制备完成;且无需进行塞子的制备,在很大程度上减少富集材料的准备时间.

• 专利类型：

  发明专利

• 申请/专利号：

  CN201610239820.5

• 申请日期：

  2016.04.15

• 公开/公告号：

  CN107297086A

• 公开/公告日：

  2017-10-27

• 发明人：

  邹汉法 刘芳洁 姚亚婷 叶明亮

• 申请人：

  中国科学院大连化学物理研究所

• 主分类号：

  B01D15/10(2006.01)I,B,B01,B01D,B01D15

• 分类号：

  B01D15/10(2006.01)I,B01D15/16(2006.01)I,B01D15/26(2006.01)I,G01N30/06(2006.01)I,G01N30/08(2006.01)I,G01N30/60(2006.01)I,B,G,B01,G01,B01D,G01N,B01D15,G01N30,B01D15/10,B01D15/16,B01D15/26,G01N30/06,G01N30/08,G01N30/60

• 主权项：

  一种有机整体小柱的制备方法,其特征在于:具体步骤如下:(1)配置甲醇与1,4‑丁二醇的混合溶液,其体积比为1:2‑2:1;(2)使用上述步骤(1)得到的甲醇/1,4‑丁二醇混合溶液配置二苯甲酮溶液,其质量体积分数为0.05‑0.20g/mL;(3)取上述步骤(2)中得到的二苯甲酮溶液5μL‑20μL,加入到20μL GE Loader Tip枪头内,置于紫外发生器中,于365nm波长紫外光下照射反应5‑20分钟;离心去除GE Loader tip枪头内的二苯甲酮溶液;(4)重复上述步骤(3)的过程1‑4次;(5)取2μL‑4μL聚合液,加入到步骤(4)中准备好的GE Loader tip枪头内,置于紫外发生器(XL‑1500A,Spectronics公司,New York,USA)中,于365nm波长下照射反应5‑20分钟,得到磷酸基离心小柱;聚合液溶剂的体积组成为:12％‑15％EGMP(乙烯基乙二醇甲基丙烯磷酸酯)、40.0‑49.0％DMSO(二甲基亚砜)、7.0‑10.0％DMF(二甲基甲酰胺)、32.0‑35.0％十二烷醇;溶质为0.05‑0.20g/mL Bis(亚甲基双丙烯酰胺);(6)配置40‑60mg/mL硫酸钛水溶液,加入到上述步骤(5)中制备好的磷酸基离心小柱内,4000‑8000g转速下离心反应10‑20分钟,弃掉离心分离出的液体;重复上述操作过程2‑4次;(7)配置洗涤水溶液1,其中,乙腈的体积分数为20‑40％、三氟乙酸的体积分数为0.1‑0.3％、余量为水,在4000‑8000g转速下离心洗涤步骤(6)得到的小柱,弃掉离心分离出的液体;重复上述操作过程4‑6次;(8)配置洗涤水溶液2,其中,氯化钠的摩尔浓度为150‑300mM、余量为水,在4000‑8000g转速下离心洗涤步骤(7)得到的小柱,弃掉离心分离出的液体;重复上述操作过程4‑6次;(9)用去离子水洗涤上述步骤(8)中的离心小柱,在4000‑8000g转速下离心洗涤,弃掉离心分离出的液体;重复上述操作过程4‑6次,获得所需产物Ti(IV)‑IMAC有机整体小柱.