一种重组质粒、重组质粒制备方法、重组杆粒及其应用

• 摘要：

  一种重组质粒、重组质粒制备方法、重组杆粒及其应用,所述重组质粒基因组整合了IBDV VP2成熟蛋白的基因序列、GP67蜂毒信号肽基因、His标签蛋白基因序列和终止密码子,且保持了IBDV的开放阅读框编码基因和GP67蜂毒信号肽基因各自的生物学功能;所述VP2成熟蛋白编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示序列;所述GP67蜂毒信号肽基因的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示序列;所述His标签蛋白基因序列如SEQ ID NO.3所示序列.本发明在VP2蛋白基因前面加了一个有利于病毒蛋白表达的蜂毒信号肽GP67,外源蛋白出核后昆虫细胞(Sf9)自身的酶会自动将其切下从而与外源蛋白分离开,不会影响外源蛋白的表达,提高VP2蛋白的胞外表达量.

• 专利类型：

  发明专利

• 申请/专利号：

  CN201910637354.X

• 申请日期：

  2019.07.15

• 公开/公告号：

  CN110423780A

• 公开/公告日：

  2019-11-08

• 发明人：

  王选年 朱艳平 申一兰 何勇 岳锋 刘佳 李鹏 孙国鹏 张艳芳

• 申请人：

  新乡学院

• 主分类号：

  C12N15/866(2006.01),C,C12,C12N,C12N15

• 分类号：

  C12N15/866(2006.01),C12N7/01(2006.01),C12N15/40(2006.01),A61K39/12(2006.01),A61P31/14(2006.01),G01N33/569(2006.01),C,A,G,C12,A61,G01,C12N,A61K,A61P,G01N,C12N15,C12N7,A61K39,A61P31,G01N33,C12N15/866,C12N7/01,C12N15/40,A61K39/12,A61P31/14,G01N33/569

• 主权项：

  1.一种重组质粒,其特征在于:所述重组质粒基因组整合了IBDV VP2成熟蛋白的基因序列、GP67蜂毒信号肽基因、His标签蛋白基因序列和终止密码子,且保持了IBDV VP2成熟蛋白的开放阅读框编码基因和GP67蜂毒信号肽基因各自的生物学功能. 2.如权利要求1所述的一种重组质粒,其特征在于:所述VP2成熟蛋白编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1 所示序列;所述GP67蜂毒信号肽基因的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示序列;所述His标签蛋白基因序列如SEQ ID NO.3所示序列. 3.如权利要求1或2所述的重组质粒的制备方法,其特征在于:由质粒pFastbac1载体质粒在其BamH 和EcoR 酶切位点酶切位点间插入SEQ ID NO.2 所示序列得到pFastbac1-GP67重组质粒,之后在pFastbac1-GP67重组质粒的Kpn和EcoR酶切位点间插入SEQ IDNO.1所示序列获得pFastbac1-GP67-VP2重组质粒. 4.如权利要求3所述的重组质粒的制备方法,其特征在于:所述His标签蛋白基因序列位于合成所述VP2蛋白编码基因的下游引物的3'端中. 5.一种重组杆粒,其特征在于:由权利要求4所述pFastbac1-GP67-VP2重组质粒转化E.coli DH10Bac感受态细胞获得rBacmid-VP2重组杆粒. 6.如权利要求5所述的一种重组杆粒的应用,其特征在于,包括以下步骤: 1)将rBacmid-VP2重组杆粒采用脂质体转染法转染至Sf9细胞中获得重组杆状病毒,; 2)对获得的重组杆状病毒进行多次扩增,以获得高滴度高感染力的重组杆状病毒,用重组杆状病毒感染大量sf9细胞以量产化获得重组蛋白; 3)将所述重组蛋白保存至蛋白保存液中为后续生产提供原材料,所述蛋白保存液中含有10 mM CaCl2和Tris-Hcl溶液. 7.如权利要求6所述的一种重组杆粒的应用,其特征在于,所述重组蛋白用于生产亚单位疫苗. 8.如权利要求6所述的一种重组杆粒的应用,其特征在于,所述重组蛋白用于生产ELISA试剂盒和免疫胶体金检测试纸条.