一种细胞膜表面展示含双信号肽PD-1蛋白的细胞模型及其应用

• 摘要：

  一种细胞膜表面展示含双信号肽PD‑1蛋白的细胞模型及其应用,细胞模型是可表达PD‑1成熟蛋白全长序列的真核宿主细胞,真核宿主细胞由构建完成的真核荧光表达载体转染至293T细胞形成,真核荧光表达载体在293T细胞上瞬时表达PD‑1蛋白,并将PD‑1蛋白展示在293T细胞表面,细胞模型在筛选能与PD‑1结合的多肽和抗体中的应用.本发明是将Kozak序列和牛Fcγ受体信号肽序列代替原来PD‑1基因上的信号肽,能将PD‑1更高效的锚定在细胞膜上,以便将犬的PD‑1成熟蛋白大量展示在真核细胞膜表面.

• 专利类型：

  发明专利

• 申请/专利号：

  CN201911077819.7

• 申请日期：

  2019.11.06

• 公开/公告号：

  CN110656092A

• 公开/公告日：

  2020-01-07

• 发明人：

  王选年 李丹 蒋力维 孙国鹏 何海汛 岳锋 李鹏 张艳芳 朱艳平 郭东光 陈威

• 申请人：

  新乡学院

• 主分类号：

  C12N5/10(2006.01),C,C12,C12N,C12N5

• 分类号：

  C12N5/10(2006.01),C12N15/12(2006.01),G01N33/569(2006.01),C,G,C12,G01,C12N,G01N,C12N5,C12N15,G01N33,C12N5/10,C12N15/12,G01N33/569

• 主权项：

  1.一种细胞膜表面展示含双信号肽PD-1蛋白的细胞模型,其特征在于:所述细胞模型是可表达PD-1成熟蛋白全长序列的真核宿主细胞,所述真核宿主细胞由构建完成的真核荧光表达载体转染至293T细胞形成,所述真核荧光表达载体在293T细胞上瞬时表达PD-1蛋白,并将PD-1蛋白展示在293T细胞表面. 2.如权利要求1所述的一种细胞膜表面展示含双信号肽PD-1蛋白的细胞模型,其特征在于:所述真核荧光表达载体为pECFP-Fc-PD-1重组载体,先由添加Kozak序列和酶切位点的牛Fcγ受体信号肽序列,插入到真核表达载体pECFP-N1的多克隆位点中形成pECFP-Fc重组载体,之后构建T-PD-1重组载体,将pECFP-Fc重组载体和T-PD-1重组载体进行酶切酶连形成pECFP-Fc-PD-1重组载体. 3.如权利要求2所述的一种细胞膜表面展示含双信号肽PD-1蛋白的细胞模型,其特征在于:所述PD-1成熟蛋白全长序列位于牛Fcγ受体信号肽序列的下游,并与真核表达载体pECFP-N1中的ECFP蛋白融合表达. 4.如权利要求3所述的一种细胞膜表面展示含双信号肽PD-1蛋白的细胞模型,其特征在于:所述PD-1成熟蛋白全长序列是犬PD-1成熟蛋白全长序列,其编码的DNA是如SEQ IDNo:1所示序列. 5.如权利要求4所述的一种细胞膜表面展示含双信号肽PD-1蛋白的细胞模型,其特征在于:所述pECFP-Fc-PD-1重组载体完整DNA序列是如SEQ ID No:2所示序列. 6.如权利要求2所述的一种细胞膜表面展示含双信号肽PD-1蛋白的细胞模型,其特征在于:所述牛Fcγ受体信号肽序列添加Kozak序列、酶切位点NheⅠ和XhoⅠ后其序列以及保护碱基后的DNA序列如SEQ ID No:3所示序列. 7.如权利要求1~6所任意一项所述的一种细胞膜表面展示含双信号肽PD-1蛋白的细胞模型的应用方法,其特征在于:所述细胞模型在筛选能与PD-1结合的生物大分子中的应用. 8.如权利要求7所述的一种细胞膜表面展示含双信号肽PD-1蛋白的细胞模型的应用方法,其特征在于:所述细胞模型在筛选能与PD-1结合的多肽中的应用,以该细胞模型为底物加入随机十二肽库,经过三轮淘洗并测序,得到能与PD-1结合的多肽. 9.如权利要求7所述的一种细胞膜表面展示含双信号肽PD-1蛋白的细胞模型的应用方法,其特征在于:所述细胞模型在筛选能与PD-1结合的抗体中的应用,以该细胞模型为底物加入待筛选的抗体,再加入荧光标记的二抗显色,进行抗体筛选.