带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型及其应用

• 摘要：

  带有荧光标记的PD‑L1膜表面表达细胞模型及其应用,细胞模型是可表达PD‑L1成熟蛋白全长序列的真核宿主细胞,所述真核宿主细胞由构建完成的真核荧光表达载体转染至293T细胞形成,所述真核荧光表达载体在293T细胞中瞬时表达PD‑L1蛋白,并将PD‑L1蛋白展示在293T细胞表面,细胞模型在筛选能与PD‑L1结合的多肽和抗体中的应用.本发明是将牛Fc γ受体信号肽序列代替原来PD‑L1基因上的信号肽,能将PD‑L1更高效的锚定在细胞膜上,以便将犬的PD‑L1成熟蛋白大量展示在真核细胞膜表面.

• 专利类型：

  发明专利

• 申请/专利号：

  CN201911076907.5

• 申请日期：

  2019.11.06

• 公开/公告号：

  CN110734895A

• 公开/公告日：

  2020-01-31

• 发明人：

  王选年 李丹 蒋力维 孙国鹏 何海汛 岳锋 李鹏 张艳芳 朱艳平 郭东光 陈威

• 申请人：

  新乡学院

• 主分类号：

  C12N5/10(2006.01),C,C12,C12N,C12N5

• 分类号：

  C12N5/10(2006.01),C12N15/85(2006.01),C12N15/65(2006.01),C12N15/66(2006.01),C07K7/08(2006.01),C07K16/28(2006.01),C12Q1/02(2006.01),C,C12,C07,C12N,C07K,C12Q,C12N5,C12N15,C07K7,C07K16,C12Q1,C12N5/10,C12N15/85,C12N15/65,C12N15/66,C07K7/08,C07K16/28,C12Q1/02

• 主权项：

  1.带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型,其特征在于:所述细胞模型是可表达PD-L1成熟蛋白全长序列的真核宿主细胞,所述真核宿主细胞由构建完成的真核荧光表达载体转染至293T细胞形成,所述真核荧光表达载体在293T细胞中瞬时表达PD-L1蛋白,并将PD-L1蛋白展示在293T细胞表面. 2.如权利要求1所述的带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型,其特征在于:所述真核荧光表达载体为pECFP-Fc-PD-L1重组载体,先由添加Kozak序列和酶切位点的牛Fc γ受体信号肽序列,插入到真核表达载体pECFP-N1的多克隆位点中形成pECFP-Fc重组载体,之后构建T-PD-L1重组载体,将pECFP-Fc重组载体和T-PD-L1重组载体进行酶切酶连形成pECFP-Fc-PD-L1重组载体. 3.如权利要求2所述的带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型,其特征在于:所述PD-L1成熟蛋白全长序列位于牛Fc γ受体信号肽序列的下游,并与真核表达载体pECFP-N1中的EYFP蛋白融合表达. 4.如权利要求3所述的带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型,其特征在于:所述PD-L1成熟蛋白全长序列是犬PD-L1成熟蛋白全长序列,其编码的DNA序列是如SEQ ID No:1所示序列. 5.如权利要求4所述的带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型,其特征在于:所述pECFP-Fc-PD-L1重组载体完整DNA序列是如SEQ ID No:2所示序列. 6.如权利要求2所述的带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型,其特征在于:所述牛Fc γ受体信号肽序列添加Kozak序列、酶切位点Nhe Ⅰ和Xho Ⅰ后其序列以及保护碱基后的DNA序列如SEQ ID No:3所示序列. 7.如权利要求7所述的带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型的应用方法,其特征在于:所述细胞模型在筛选能与PD-L1结合的生物大分子中的应用. 8.如权利要求7所述的带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型的应用方法,其特征在于:所述细胞模型在筛选能与PD-L1结合的多肽中的应用,以该细胞模型为底物加入随机十二肽库,经过三轮淘洗并测序,得到能与PD-L1结合的多肽. 9.如权利要求7所述的带有荧光标记的PD-L1膜表面表达细胞模型的应用方法,其特征在于:所述细胞模型在筛选能与PD-L1结合的抗体中的应用,以该细胞模型为底物加入待筛选的抗体,再加入荧光标记的二抗显色,进行抗体的筛选.