• 一种紫菜功能基因过表达质粒的构建方法和应用

    • 摘要:

      本发明属于海洋生物领域,具体地说涉及一种紫菜功能基因过表达质粒的构建方法和应用.构建方法:利用引物对扩增条斑紫菜光系统I捕光天线蛋白LHCI基因的CDS序列,而后将其连接至质粒PEA7上,即获得条斑紫菜功能基因过表达质粒;本发明方法高效,成功率高,易于筛选.是研究紫菜功能基因作用机制的重要方法,为紫菜关键基因功能的分子生物学研究提供了一种有效途径.

    • 专利类型:

      发明专利

    • 申请/专利号:

      CN201911196420.0

    • 申请日期:

      2019.11.29

    • 公开/公告号:

      CN110777162A

    • 公开/公告日:

      2020-02-11

    • 发明人:

      王广策 郑阵兵 何帮翔

    • 申请人:

      中国科学院海洋研究所

    • 主分类号:

      C12N15/82(2006.01),C,C12,C12N,C12N15

    • 分类号:

      C12N15/82(2006.01),C12N15/66(2006.01),A01H13/00(2006.01),C,A,C12,A01,C12N,A01H,C12N15,A01H13,C12N15/82,C12N15/66,A01H13/00

    • 主权项:

      1.一种紫菜功能基因过表达质粒的构建方法,其特征在于:利用引物对扩增条斑紫菜光系统I捕光天线蛋白LHCI基因的CDS序列,而后将其连接至质粒PEA7上,即获得条斑紫菜功能基因过表达质粒; 引物对:F:agcaagcccggatccatgttgg gctttgcgtcg,R:agatctgagtccggactagtggtggtggtggtggtgcgggaagagcttgccg. 2.按权利要求1所述的紫菜功能基因过表达质粒的构建方法,其特征在于:所述条斑紫菜光系统I捕光天线蛋白LHCI基因的CDS序列插入质粒PEA7的启动子和终止子之间,并在终止子前加入6个组氨酸密码子gtg作为蛋白表达验证标签. 3.按权利要求1或2所述的紫菜功能基因过表达质粒的构建方法,其特征在于: 1)提取条斑紫菜总RNA,反转成cDNA; 2)以上述cDNA为模板,通过引物对PCR扩增LHCI基因; 3)回收PCR产物,获得目的基因;将其连接至质粒PEA7的启动子和终止子之间,即构建得LHCI功能基因表达载体;其中,启动子为紫菜PyAct1,终止子为NOS. 4.按权利要求3所述的条斑紫菜功能基因过表达质粒的构建方法,其特征在于:所述PCR扩增反应条件为:95℃变性30秒,68℃退火30秒,70℃延伸2分钟,共计35个循环. 5.一种权利要求1所述方法构建的紫菜功能基因过表达质粒的应用,其特征在于:所述质粒在紫菜内过表达调控紫菜代谢. 6.按权利要求5所述的应用,其特征在于:将所述质粒通过基因枪的方法进行质粒转化,所述宿主为紫菜叶状体. 7.一种紫菜的表达载体,其特征在于:载体依次为启动子、目的基因和终止子,且终止子前引入蛋白表达验证标签;所述启动子为紫菜PyAct1,终止子为NOS.