T细胞免疫检查点PD-L1的适配体筛选、鉴定方法及抗肿瘤应用

• 摘要：

  本发明属于生物医学领域,尤其是涉及T细胞免疫检查点PD‑L1的适配体筛选、鉴定方法及抗肿瘤应用,包括以下步骤:1)筛选文库及引物;2)对文库进行处理;3)进行流式细胞术检测文库富集;4)进行TA克隆测序;5)平衡解离常数检测;6)六条候选适配体的结合能力检测;7)温度对适配体结合能力的影响;8)截短优化适配体序列,本发明具有便携化、操作简单、成本低等特点,可以在人体抗肿瘤临床中试验应用,为人类对抗肿瘤的临床使用提供了一种很好的方法.

• 专利类型：

  发明专利

• 申请/专利号：

  CN201911400633.0

• 申请日期：

  2019.12.30

• 公开/公告号：

  CN111004805A

• 公开/公告日：

  2020-04-14

• 发明人：

  赵永祥 李大力 程亮 彭睿

• 申请人：

  广西医科大学

• 主分类号：

  C12N15/115(2010.01),C,C12,C12N,C12N15

• 分类号：

  C12N15/115(2010.01),C12N15/10(2006.01),G01N33/68(2006.01),G01N33/53(2006.01),A61K31/7088(2006.01),A61P35/00(2006.01),C,G,A,C12,G01,A61,C12N,G01N,A61K,A61P,C12N15,G01N33,A61K31,A61P35,C12N15/115,C12N15/10,G01N33/68,G01N33/53,A61K31/7088,A61P35/00

• 主权项：

  1.一种T细胞免疫检查点PD-L1的适配体筛选、鉴定方法,其特征在于:包括以下步骤: 1)筛选所用的DNA寡核苷酸文库、引物、相关细胞及试剂; 2)对以上所述步骤1)的DNA寡核苷酸文库进行处理,采用筛选法,前两轮运用正向筛选法,自第三轮的筛选起,反向筛选,再进行正向筛选,得到单链DNA干粉,置于-20℃温度中保存; 3)将以上所述步骤2)得到的单链DNA干粉进行流式细胞术检测文库富集; 4)进行TA克隆测序; 5)平衡解离Kd值常数检测; 6)六条候选适配体的结合能力检测,根据平衡解离常数检测及结合能力检测,筛选,得到hPDL1-6作为PDL1蛋白的核酸适配体; 7)温度对适配体结合能力的影响. 将正筛细胞与hPDL1-6适配体分别在4℃和37℃下共孵育30min,孵育完毕后进行流式检测; 8)截短优化适配体序列. 2.根据权利要求1所述T细胞免疫检查点PD-L1的适配体筛选、鉴定方法,其特征在于:所述TA克隆测序中的PD-L1的适配体,是1~9条序列中的核苷酸序列中的任意一条或几条序列. 3.根据权利要求1所述T细胞免疫检查点PD-L1的适配体筛选、鉴定方法,其特征在于:所述截短优化的适配体为PD-L1蛋白的核酸适配体,是7~9条序列中的核苷酸序列中的任意一条或几条序列. 4.一种T细胞免疫检查点PD-L1的适配体的应用,其特征在于:如权利要求1所述的T细胞免疫检查点PD-L1的适配体在抗肿瘤临床中应用.