一种同步检测嗜根寡养单胞菌群体感应信号分子DSF与BDSF的方法

• 摘要：

  本说明书一个或多个实施例提供一种同步检测嗜根寡养单胞菌群体感应信号分子DSF与BDSF的方法,通过超高效液相色谱‑三重四级杆质谱串联飞行时间质谱技术,采用多反应监测模式,使用与目标物质DSF与BDSF母离子相同的离子作为子离子,进行质谱信号的采集.本说明书一个或多个实施例建立了嗜根寡养单胞菌中信号分子DSF与BDSF检测的定性定量方法,该方法高效、准确、选择性强、灵敏度高,适用范围广.

• 专利类型：

  发明专利

• 申请/专利号：

  CN202010324291.5

• 申请日期：

  2020.04.22

• 公开/公告号：

  CN111595955A

• 公开/公告日：

  2020-08-28

• 发明人：

  庄绪亮 刘颖 高婕 白志辉 吴尚华 庄国强

• 申请人：

  中国科学院生态环境研究中心

• 主分类号：

  G01N30/02(2006.01),G,G01,G01N,G01N30

• 分类号：

  G01N30/02(2006.01),G01N30/34(2006.01),G01N30/86(2006.01),G,G01,G01N,G01N30,G01N30/02,G01N30/34,G01N30/86

• 主权项：

  1.一种同步检测嗜根寡养单胞菌群体感应信号分子DSF与BDSF的方法,其特征在于,通过超高效液相色谱-三重四级杆质谱串联飞行时间质谱技术,采用多反应监测模式,使用与目标物质DSF与BDSF母离子相同的离子作为子离子,进行质谱信号的采集; 其中,所述DSF的结构式如下所示: 所述BDSF的结构式如下所示: 2.根据权利要求1所述的同步检测嗜根寡养单胞菌群体感应信号分子DSF与BDSF的方法,其特征在于,所述DSF与BDSF的母离子[M-H]-分别为m/z 211.1和m/z 197.1. 3.根据权利要求1所述的同步检测嗜根寡养单胞菌群体感应信号分子DSF与BDSF的方法,其特征在于,利用乙腈溶解DSF与BDSF. 4.根据权利要求1所述的同步检测嗜根寡养单胞菌群体感应信号分子DSF与BDSF的方法,其特征在于,所述高效液相色谱的条件为:流动相A为含有缓冲溶液的水溶液,缓冲溶液与水溶液的体积比5:100;流动相B为缓冲溶液、乙腈和异丙醇,缓冲溶液、乙腈与异丙醇的体积比为5:55:45;其中,缓冲溶液的配制为:用浓氨水调节100mM冰醋酸至pH＝5. 5.根据权利要求4所述的同步检测嗜根寡养单胞菌群体感应信号分子DSF与BDSF的方法,其特征在于,所述高效液相色谱的梯度洗脱程序为:0~6min,70％B~100％B,6~8min,100％B,8~10min,100％~70％B;流速0.2~0.5ml/min,柱温32~38℃. 6.根据权利要求1所述的同步检测嗜根寡养单胞菌群体感应信号分子DSF与BDSF的方法,其特征在于,所述质谱的条件为:电喷雾离子源,负离子检测模式,雾化器流速2~4L/min,加热器流速8~12L/min,干燥器流速8~12L/min,离子源接口温度280~320℃,DL温度240~260℃,加热模块温度390~410℃; 多反应监测模式的参数为:目标物质DSF,检测离子对为:母离子m/z 211.1和子离子m/z 211.1,驻留时间20msec,Q1预四级偏置电压15V,碰撞能量7eV,Q3预四级偏置电压24V; 目标物质BDSF,检测离子对为:母离子m/z 197.1和子离子m/z 197.1,驻留时间100msec,Q1预四级偏置电压14V,碰撞能量8eV,Q3预四级偏置电压22V. 7.根据权利要求1-6任一项所述的同步检测嗜根寡养单胞菌群体感应信号分子DSF与BDSF的方法,其特征在于,包括以下步骤: (1)标准溶液的配制 用乙腈分别溶解DSF与BDSF,分别得到DSF的储液与BDSF的储液; (2)混合标准溶液的配制 将DSF的储液与BDSF的储液混合并用乙腈逐级梯度稀释定容; (3)待测样品的处理 将嗜根寡养单胞菌的培养液进行离心,取上清液,调节上清液的pH值,加入有机溶剂进行超声萃取,将萃取后的溶液静置过夜,然后旋转蒸发,氮吹,乙腈复溶,过滤,得到待测样品; (4)待测样品和混合标准溶液的检测 通过超高效液相色谱-三重四级杆质谱串联飞行时间质谱技术,采用多反应监测模式,使用与目标物质DSF与BDSF母离子相同的离子作为子离子,进行待测样品和混合标准溶液的质谱信号的采集. 8.根据权利要求7所述的同步检测嗜根寡养单胞菌群体感应信号分子DSF与BDSF的方法,其特征在于,以梯度混合标准液的浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制DSF的标准工作曲线和BDSF的标准工作曲线,将待测样品中DSF和BDSF的峰面积分别代入DSF的标准工作曲线和BDSF的标准工作曲线中,分别得到待测样品中DSF的浓度和BDSF的浓度. 9.根据权利要求7所述的同步检测嗜根寡养单胞菌群体感应信号分子DSF与BDSF的方法,其特征在于,混合标准溶液中DSF的浓度为0.5~200μg/L,混合标准溶液中BDSF的浓度为0.25~100μg/L. 10.根据权利要求7所述的同步检测嗜根寡养单胞菌群体感应信号分子DSF与BDSF的方法,其特征在于,所述嗜根寡养单胞菌的培养条件为:培养温度28~30℃,转速120~180rpm,培养时间为60~80h,培养基为YEB培养基; 所述离心为在3000~5000g转速下离心20~40min,上清液的pH值为3~4,有机溶剂为乙酸乙酯,乙酸乙酯与上清液的体积比为1:1,超声萃取的次数为2~3次,超声萃取的时间为20~40min,旋转蒸发的温度为35~45℃.