一种纳米酶、其制备方法及在葡萄糖检测中的应用

• 摘要：

  本发明具体涉及一种纳米酶、其制备方法及在葡萄糖检测中的应用.所述纳米酶同时具有葡萄糖氧化酶及过氧化氢氧化酶样活性,从而能实现葡萄糖的级联检测,具有灵敏度高、易回收、成本低等优点.所述葡萄糖检测步骤包括:(1)圆底烧瓶中,2mg纳米酶加入到2mLPBS缓冲液(0.1M,PH＝7)中,其中包含不同浓度的葡萄糖,在30℃条件下,用λ≥420nm波长的光照并敞口放置吹扫氧气;(2)30min后,200uL TMB(4mM)和1.8mL醋酸缓冲液(0.1M,PH＝4.0)被加入上述反应液中,在30℃黑暗条件下孵育30min;(3)利用紫外分光光度计测定步骤(2)得到的混合液中的葡萄糖含量.

• 专利类型：

  发明专利

• 申请/专利号：

  CN202010632335.0

• 申请日期：

  2020.07.03

• 公开/公告号：

  CN111974431A

• 公开/公告日：

  2020-11-24

• 发明人：

  唐波 牛伟华 杨燕美 陈蓁蓁

• 申请人：

  山东师范大学

• 主分类号：

  B01J27/24(2006.01),B,B01,B01J,B01J27

• 分类号：

  B01J27/24(2006.01),G01N33/66(2006.01),G01N21/31(2006.01),B,G,B01,G01,B01J,G01N,B01J27,G01N33,G01N21,B01J27/24,G01N33/66,G01N21/31

• 主权项：

  1.一种纳米酶的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括如下步骤: 将三聚氰胺、氯化钾、氢氧化钾按比例混合均匀后进行煅烧. 2.如权利要求1所述纳米酶的制备方法,其特征在于,所述三聚氰胺、氯化钾、氢氧化钾的摩尔质量比为1:0.06~0.09:0.001~0.003;优选的,所述三聚氰胺、氯化钾、氢氧化钾混合后通过研磨的方式进行混均. 3.如权利要求1所述纳米酶的制备方法,其特征在于,所述煅烧在封闭状态下进行煅烧;优选的,所述煅烧时,将三聚氰胺、氯化钾、氢氧化钾置于带盖的瓷坩埚中. 4.如权利要求1所述纳米酶的制备方法,其特征在于,所述煅烧温度为500~600℃;或所述煅烧时间为3~5h;或所述煅烧升温速率为2~2.5℃·min-1;优选的,所述煅烧:550℃下煅烧4h,升温速率为2.2℃·min-1. 5.如权利要求1所述纳米酶的制备方法,其特征在于,所述制备方法中,还包括将煅烧后的产品通过超声分散均匀及干燥的步骤; 优选的,所述超声分散的操作步骤如下:将煅烧后的产品进行研磨,并加入水中超声使其分散为水溶液;过滤该水溶液得到固体部分并干燥,即为纳米酶; 进一步优选的,所述超声分散的方式如下:将煅烧完成后的产品轻轻地研磨,并在超声波作用下作为水溶液处理3h;超声处理后,将粉末过滤、洗涤并在80℃下干燥. 6.权利要求1-5任一项所述制备方法得到的纳米酶. 7.一种葡萄糖的检测方法,其特征在于,所述检测方法包括如下步骤:将纳米酶加入待测溶液中孵育,同时配合光照并通入氧气;再向上述体系中加入TMB染料避光孵育一段时间,之后通过检测吸光度确定葡萄糖含量; 优选的,所述待测溶液为包括但不限于血液样本、尿液样本或其他含葡萄糖的溶液; 优选的,所述光照条件为:λ≥420nm波长的光照. 8.如权利要求7所述葡萄糖的检测方法,其特征在于,所述纳米酶加入待测溶液中进行孵育,所述孵育时间为25~50min; 或所述TMB染料包括TMB及醋酸缓冲液; 或所述加入TMB后孵育时间为25~50min范围内进行调整. 9.如权利要求7所述葡萄糖的检测方法,其特征在于,所述吸光度检测通过紫外分光光度计进行检测; 优选的,所述检测通过回归法进行检测,通过检测已知葡萄糖浓度的对照组溶液建立回归曲线从而计算待测溶液中葡萄糖的浓度. 10.一种可视化葡萄糖检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中包括权利要求6所述纳米酶; 优选的,所述试剂盒中,还包括缓冲溶液及TMB显色底物; 进一步优选的,所述缓冲溶液为PBS缓冲液及酸性缓冲液.