一种用于细胞内蛋白质复合物原位分析的载体及其制备方法和应用

• 摘要：

  本发明涉及一种用于细胞内蛋白质复合物原位分析的载体及其制备方法和应用.所述的细胞内蛋白质复合物原位分析的载体,其作用在于将用于蛋白质复合物分析的化学交联剂,通过跨膜递送的方式,运送至细胞内特定部位,并且释放化学交联剂,从而使蛋白质复合物进行原位交联.并结合结合质谱技术,解析对细胞内蛋白质复合物进行时空动态变化规律的分析.这对于理解生命过程、揭示疾病机制、筛选生物标志物以及寻找药物靶标具有重大意义.

• 专利类型：

  发明专利

• 申请/专利号：

  CN201910505367.1

• 申请日期：

  2019.06.12

• 公开/公告号：

  CN112083082A

• 公开/公告日：

  2020-12-15

• 发明人：

  张丽华 陈玉宛 杨开广 周雯 裴家琪 梁振 张玉奎

• 申请人：

  中国科学院大连化学物理研究所

• 主分类号：

  G01N30/02(2006.01),G,G01,G01N,G01N30

• 分类号：

  G01N30/02(2006.01),G01N30/06(2006.01),G,G01,G01N,G01N30,G01N30/02,G01N30/06

• 主权项：

  1.一种用于细胞内蛋白质复合物原位分析的载体,其特征在于: 载体中包裹了用于蛋白质复合物分析的交联剂;以聚丙交酯-乙交酯为载体骨架;以双十二烷基二甲基溴化铵为骨架上的靶向驱动试剂;以蓖麻油聚氧乙烯醚为交联剂溶解剂,以二氯甲烷作为聚丙交酯-乙交酯的溶解剂. 2.如权利要求1所述的一种用于细胞内蛋白质复合物原位分析的载体,其特征在于:所述的交联剂为:其两侧基团均为与蛋白上氨基反应的琥珀酰亚胺基团、卤代芳烃、亚胺酸酯;或均为与蛋白上巯基反应的马来酰亚胺基团、2-巯基吡啶、硫代磺酸盐、卤代乙酰基、吡啶基二硫化物;或均为与蛋白上羧基反应的碳化二亚胺、异氰酸盐;或均为与蛋白上糖链反应的酰肼基团;或均为与蛋白质中的氨基酸残基发生反应的非特异反应基团的苯基叠氮基团、双吖丙啶;所述的交联剂,其两侧基团分别为上述任一反应基团. 3.如权利要求2所述的一种用于细胞内蛋白质复合物原位分析的载体,其特征在于:所述的琥珀酰亚胺基团为磺酸基-琥珀酰亚胺和羟基-琥珀酰亚胺中的一种或两种;所述的苯基叠氮基团为硝基苯叠氮基团和卤代苯叠氮基团中的一种或两种. 4.如权利要求1所述的一种用于细胞内蛋白质复合物原位分析的载体,其特征在于:其中各组分的质量比为: 蓖麻油聚氧乙烯醚1-5质量份;聚丙交酯-乙交酯10-50质量份;双十二烷基二甲基溴化铵1-2质量份;用于蛋白质复合物分析的交联剂1-10质量份;二氯甲烷100-800质量份. 5.如权利要求1所述的一种用于细胞内蛋白质复合物原位分析的载体,其特征在于:所述聚丙交酯-乙交酯的分子量为5000-100000. 6.如权利要求1-5任一项所述的一种用于细胞内蛋白质复合物原位分析的载体的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:载体通过聚合物乳液固化的方式制备:将蓖麻油聚氧乙烯醚、聚丙交酯-乙交酯、用于蛋白质复合物分析的交联剂、双十二烷基二甲基溴化铵溶于二氯甲烷中,形成混合物,将以上混合物倒入聚乙烯醇溶液中,并进行1-5分钟超声,超声结束后用聚乙烯醇溶液对载体进行固化. 7.如权利要求6所述的一种用于细胞内蛋白质复合物原位分析的载体的制备方法,其特征在于:所述的聚乙烯醇溶液为质量百分浓度为0.1％-5％的聚乙烯醇水溶液. 8.权利要求1所述的一种用于细胞内蛋白质复合物原位分析的载体的应用,其特征在于:载体与细胞在1640培养液中进行共孵育,孵育1-12小时后,收集细胞,然后利用离子液体从细胞提取蛋白质和蛋白质复合物,采用膜上变性、还原、烷基化的方法对提取蛋白质和蛋白质复合物进行预处理. 9.权利要求8所述的用于细胞内蛋白质复合物原位分析的载体的应用,其特征在于:对蛋白质复合物进行胞内交联后,进行样品预处理后,最后利用nano LC-MS/MS进行蛋白质组数据采集. 10.根据权利要求1所述的用于细胞内蛋白质复合物原位分析的载体,其特征在于:用于鉴定的蛋白质复合物的来源为:细胞蛋白质提取液、胞浆蛋白质提取液、血浆蛋白质提取液、组织蛋白质提取液、单一蛋白质复合物中的一种或二种以上.