一种白桦叶片基因组DNA提取方法

• 摘要：

  本发明公开了一种白桦叶片基因组DNA提取方法,改良了CTAB与STE溶液;采用常温下等体积的改良CTAB溶液和STE溶液洗涤充分研磨的材料2次;水浴裂解温度由65℃提高至70℃;在沉淀DNA时,采用无水乙醇:异丙醇(体积比为2:1)混合沉淀剂,低速离心,以降低杂质的沉淀.这种方法能分离出高质量的白桦叶片基因组DNA.

• 专利类型：

  发明专利

• 申请/专利号：

  CN201310016274.5

• 申请日期：

  2013.01.17

• 公开/公告号：

  CN103013985A

• 公开/公告日：

  2013-04-03

• 发明人：

  魏志刚 杨传平 张力杰 曲赞霜 候聪

• 申请人：

  东北林业大学

• 主分类号：

  C12N15/10(2006.01)I,C,C12,C12N,C12N15

• 分类号：

  C12N15/10(2006.01)I,C,C12,C12N,C12N15,C12N15/10

• 主权项：

  一种白桦叶片基因组DNA提取方法,其特征在于,包括以下步骤:①叶片在加液氮的研钵中研磨至细末后,加入300μL改良STE溶液,300μL改良CTAB溶液和20μLβ-巯基乙醇,混合后震荡3min;改良CTAB溶液配方:2.5﹪(W/V)CTAB,150mmol/L??Tris??Cl(pH8.0),20mmol/L??EDTA(pH8.0),1.4mmol/L??NaCl;改良SET溶液配方:150mmol/L??Tris??Cl(pH8.0),20mmol/L??EDTA(pH8.0),1.4mmol/L??NaCl;②常温5000g离心5min,弃上清;向沉淀中加入加600μL改良CTAB溶液和20μLβ-巯基乙醇70℃水浴15min后16060g离心5min;③取上清加入等体积氯仿充分混匀,16060g离心5min,重复此步骤1~2次;④取上清加入等体积的无水乙醇:异丙醇混合液,无水乙醇:异丙醇的体积比为2:1,上下颠倒混合均匀后常温下静置3min,6080g离心3min;⑤倒掉上清液,用70%预冷的乙醇洗涤2~3次,干燥后溶于50μL??TE或去离子水中;⑥电泳检测DNA的完整性,A260/280测定DNA浓度和纯度.