• 应用线虫Hsp12.2蛋白表达量作为标识物鉴定农药滴丁酯的方法

    • 摘要:

      应用线虫Hsp12.2蛋白表达量作为标识物鉴定农药滴丁酯的方法,本发明涉及一种农药滴丁酯的检测方法,它为了解决现有农药滴丁酯的检测方法的检出限较低的问题.鉴定方法:一、配置培养液;二、加入待测液体;三、再接入秀丽隐杆线虫进行培养;四、配置浸泡液;五、冻融后的线虫置于浸泡液中;六、配置反应试剂;七、反应试剂中加入Hsp12.2蛋白抗体和线虫,孵育处理;八、加入荧光标记的二抗染色;九、进行荧光强度检测,完成滴丁酯的检测.本发明通过线虫Hsp12.2蛋白表达量作为标识物鉴定农药滴丁酯,可检测出浓度为0.002%的滴丁酯,实现了对可疑农药的高效检测.

    • 专利类型:

      发明专利

    • 申请/专利号:

      CN201610236084.8

    • 申请日期:

      2016.04.15

    • 公开/公告号:

      CN105911290A

    • 公开/公告日:

      2016-08-31

    • 发明人:

      王云彪

    • 申请人:

      中国科学院东北地理与农业生态研究所

    • 主分类号:

      G01N33/68(2006.01)I,G,G01,G01N,G01N33

    • 分类号:

      G01N33/68(2006.01)I,G,G01,G01N,G01N33,G01N33/68

    • 主权项:

      应用线虫Hsp12.2蛋白表达量作为标识物鉴定农药滴丁酯的方法,其特征在于是按下列步骤实现:一、将0.3g KH2PO4、0.6g Na2HPO4和0.4~0.6g NaCl溶于100mL去离子水中,得到培养液;二、将步骤一得到的10mL培养液置于培养皿中,然后加入待测液体,得到待测培养液体;三、向待测培养液体中接入100~120条秀丽隐杆线虫进行培养,得到接有秀丽隐杆线虫的待测培养液;四、将0.8gNaCl、0.02g KCl、0.18gNa2HPO4·2H2O和0.01gKH2PO4混合,用蒸馏水定容至100mL,调节体系的pH=7.0~7.5,再加入10g牛血清蛋白,得到浸泡液;五、取出步骤三中的秀丽隐杆线虫置于液氮中反复冻融多次,然后放入步骤四的浸泡液中,得到浸泡处理的秀丽隐杆线虫;六、将2.4g的Tris‑Base、8.8g的NaCl和0.5mL的Tween 20混合,然后用去离子水定容至1000mL,得到反应试剂;七、将0.1g Hsp12.2蛋白抗体加入5mL步骤六的反应试剂中,然后加入浸泡处理的秀丽隐杆线虫,在摇床上摇动孵育处理,得到孵育处理的秀丽隐杆线虫;八、通过浸泡液清洗孵育处理的秀丽隐杆线虫,然后加入0.1g荧光标记的二抗染色处理,得到染色后的秀丽隐杆线虫;九、在荧光显微镜下进行荧光强度检测,通过显微分析量化Hsp12.2蛋白表达量,检测待测液体中是否含有农药滴丁酯.