本发明公开了一种胶质母细胞瘤中同时敲除EGFRwt和EGFRvIII的方法,涉及DNA重组技术.本发明中的sgRNA在EGFR基因的靶向位点位于EGFR基因的第17号外显子上,是表达EGFR跨膜区的基因序列.本发明通过分别构建Cas9和sgRNA慢病毒,并将二者感染胶质瘤细胞的方法,从而达到同时敲除胶质瘤细胞中EGFRwt/vIII的目的.使用本发明所述方法可同时稳定的敲除EGFR wt和EGFRvIII两个基因,敲除后可有效的抑制肿瘤发生发展.本发明所述sgRNA有望在治疗EGFR扩增和EGFRvIII突变型胶质母细胞瘤的新型药物中得到应用.
发明专利
CN201611101618.2
2016.12.05
CN106754917A
2017-05-31
康春生 黄凯 王蕴非 王琦雪 杨超
天津医科大学总医院
C12N15/113(2010.01)I,C,C12,C12N,C12N15
C12N15/113(2010.01)I,C12N15/867(2006.01)I,C12N5/10(2006.01)I,C,C12,C12N,C12N15,C12N5,C12N15/113,C12N15/867,C12N5/10
一种在胶质母细胞瘤中基于CRISPR/Cas9系统同时靶向敲除EGFRwt和EGFRvIII的sgRNA,其特征在于:所述sgRNA的基因序列如Seq ID NO.1所示.