内分生孢子

某些细菌生长的一定阶段,在细胞内形成一个圆形、椭圆形或柱形的休眠体.由于它位于细胞内,为区别放线菌、霉菌等形成的分生孢子,故又称内生孢子

简介常指由真菌产生的一种形小、量大、外生的无性繁殖体。多为单细胞、色较深、不运动、抗干燥。一般由分生孢子梗等特殊菌丝通过断裂形成，成熟后分生。形态、构造、大小、颜色和排列等特征因种而异，是菌种鉴定的重要依据。实践上可用于分离、筛选、育种、保藏和接种扩大等。放线菌也有类似的分生孢子。一种无性孢子，可以为一到多个细胞的，和有许多不同的形状（子囊菌、担子菌、半知菌产生的无性孢子,大多由芽殖、裂殖方式产生）。

鉴定方式内生真菌的分离培养与保存菌株Sal54是从采自江苏省盐城市大丰港海滩的野生盐生海芦笋中分离得到。在无菌操作下, 取一根植株, 依次经过75%乙醇、1%次氯酸钠、75%乙醇各浸泡1min, 然后用无菌水漂洗3次, 无菌吸水纸吸干其表面水分。用灭菌后的剪刀将其剪成7~9mm小段, 放在PDA平板上, 每板3~5根, 于28℃恒温培养至植物组织内部长出菌丝。将真菌转移到新的平板培养基上划线分离得到单个菌落, 然后转移到PDA斜面试管中, 4℃保存。

真菌分离纯化与发酵培养基PDA分离培养基 (g/L) :土豆200、葡萄糖20、琼脂20、食盐30, 自来水配制。

液体发酵培养基 (g/L) :土豆200、麦芽糖20、甘露醇20、葡萄糖10、味精5、蛋白胨5、酵母膏3, p H6.0。

试剂与仪器Taq酶及PCR相关试剂 (包括d NTP与PCR Buffer等) 上海天根生化科技 (北京) 有限公司;OMEGA真菌基因组试剂盒 (Fungal DNA Kit 50) 及引物 (ITS1/ITS4/NS1/NS8) 上海捷瑞生物工程有限公司;其他分析纯试剂南京寿德试剂器材有限公司。

ECLIPSE TE2000-S荧光倒置显微镜日本Nikon株式会社;Microfuge 22R台式微量冷冻离心机美国Beckman公司;TP600型梯度PCR仪日本Ta Ka Ra公司;DYCP-31DN电泳仪北京市六一仪器厂;JS-380C全自动数码凝胶成像分析仪上海培清科技有限公司。

菌株的耐盐度实验在真菌发酵用液体培养基中分别添加30、60、90、120、150、180g/L的Na Cl, 接种后于28℃、150r/min培养7d, 观察生长情况, 每组实验平行3次。

菌株的形态学观察从保藏菌种的斜面培养基中挑取菌丝转接到PDA平板培养基中间位置, 28℃培养4~5d, 观察菌落大小、颜色、质地等形态特征。挑取菌落边缘菌丝, 制作水浸片, 在光学显微镜下观察菌丝体、孢子、孢子梗等。

基因组DNA的提取从保藏菌种的斜面培养基中挑取菌丝转接到PDA平板上, 28℃培养4~5d。基因组DNA的提取采用真菌基因组试剂盒 (Fungal DNA Kit 50) , 严格按照说明书操作。提取的基因组DNA在1%琼脂糖凝胶中电泳检测 (120V, 30min) , 溴化乙锭 (EB) 染色。4℃保存备用, 或于-20℃中长期保存。1

本词条内容贡献者为:

张磊 - 副教授 - 重庆师范大学