液体培养基

液体培养基（ liquid culture medium），固体培养基的对应词，是微生物或动植物细胞的液状培养基。它具有进行通气培养、振荡培养的优点。在静止的条件下，在菌体或培养细胞的周围，形成透过养分的壁障，养分的摄入受到阻碍。由于在通气或在振荡的条件下，可消除这种阻碍以及增加供氧量，所以有利于细胞生长，提高生产量。

简介培养基（Medium）是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素，用于单种微生物培养和鉴定。

液体培养基是培养基物理分类一种，是相对固体培养基而言的，是微生物或动植物细胞的液状培养基。在液体培养基中的培养称为液中培养、液体培养或液内培养。

培养基由于配制的原料不同，使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基（如组织培养基），较长时间的贮存，必须放在3~6℃的冰箱内。

培养基的配制1.配料

配方换算→在容器中加入少量水〔蒸馏水，自然水〕→按照配方称取各种药品〔依次加入〕→加足所需水量《一药一勺，取药后立即盖上瓶盖》。

2.溶解

淀粉溶解：少量冷水调成糊状

加热溶解，特别是加有琼脂的培养基，一定要煮沸，琼脂的熔解温度95～97℃ ，且需要边

加热边搅拌以防止烧焦。

3.调PH

用1N的盐酸或的1N NaOH把培养基调节到所要求的值。

4.过滤

滤纸或棉花进行过滤。

5.分装

一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。

(1)三角瓶

若作静置培养，则100 ml培养基/250 ml的三角瓶，最多不能超过150 ml培养基/250 ml的

三角瓶，否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞，造成染菌；若作摇瓶培养，则15～20 ml培养基/250

ml的三角瓶，保证通气良好。

(2)试管分装

液体培养基一般装4～5 ml，约试管的1/4高度；

固体斜面培养基一般装3～4 ml，约试管的1/5高度。

6.包扎

分装好后，塞上棉塞，在用牛皮纸将棉塞包裹好，防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。

7.灭菌

按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高，营养成分会被破坏，培养

基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。

8.摆斜面

灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放，使其凝固成为一个斜面，约占试管长度的1/2。

9.贮存

培养基在30℃下放置一天，无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用

配制培养基的原则根据培养目的需要选择适宜的营养物质由于微生物营养类型复杂，不同微生物有不同的营养要求。因此，要根据不同微生物的营养需求选择适宜的营养物质，配制针对性强的培养基。

自养微生物有较强的合成能力，能以简单的无机物如co2和无机盐合成复杂的细胞物质。因此，培养自养微生物的培养基应由简单的无机物组成。

异养微生物的合成能力较弱，不能以CO2作为唯一碳源或主要碳源，故应在培养基中至少添加一种有机物。1

注意营养物质的浓度与配比要合适微生物只有在营养物质浓度及其比例合适时才能良好生长。营养物质浓度过低不能满足现生长需要，过高又抑制其生长。例如，适量的蔗糖是异养微生物的良好碳源和能源，但高浓度蔗糖则抑制菌体生长。金属离子是微生物生长所不可缺少的矿质养分，但浓度扩大，尤其是重金属离子，反而抑制其生长，甚至产生杀菌作用。

控制培养基的条件(1) 控制培养基的pH 配制培养基必须根据微生物的特点调节pH。各大类微生物要求的适宜生长pH范围不同。如霉菌与酵母菌一般为5.0-6.0, 细菌为6.5-7.5.放线菌为7.5-8.5.培养基的pH与其C/N有极大关系。C/N高的培养基，例如培养各种真菌的培养基，经培养后其pH明显下降;相反，C/N低的培养基，例如培养一般细菌的培养基， 经培养后，其pH则明显上升。这是由于营养物质的消耗与代谢产物的积累，改变了培养基的pH，若不及时控制，将导致菌体生长停止。

(2)调节氧化还原电位(Eh) 各种微生物对培养基的Eh要求不同。适宜好氧微生物生长的Eh值一般为+0.3~+0.4V，厌氧微生物只能在+0.1V以下生长，因此，培养好氧微生物必须保证氧的供应，可在培养基中加入氧化剂提高Eh值。

(3)调节渗透压 多数微生物能耐受较大范围渗透压的变化。培养基中营养物质的浓度过大，会使渗透压过高，使细胞发生质壁分离而抑制微生物生长。低渗溶液则使细胞吸水膨胀易破裂，因此，配制培养基时要掌握营养物质的浓度。常在培养基中加人适量的Nacl以提高渗透压。

原料来源的选择力求节约配制培养基还应遵循力求节约的原则，尽量选用价格便宜、来源方便的原料。特别是在工业发酵中，培养基用量大，更应注意利用低成本的原料，降低产品成本。

灭菌处理为了避免杂菌污染，获得微生物纯培养物，培养基必须及时严格灭菌。通常采用高压蒸汽灭菌。一般培养基用0. IMPa (121℃)维持15 ~ 30min即可彻底灭菌。长时间的高温灭菌会使某些不耐热的物质破坏，如使糖类物质形成氨基糖、焦糖。因此，含糖培养基常用0.05MPa (110℃) 灭菌20 ~ 30min某些对糖类要求更高的培养基，可先将糖过滤除菌或间歇灭菌，再与其他已灭菌的成分混合。长时间高温灭菌也会使磷酸盐、碳酸盐与钙、镁铁等阳离子形成难溶性化合物而产生沉淀。为了防止这类沉淀发生，可将这些物质分别灭菌，冷却后再混合；也可在培养基中加入少量整合剂(0.01%乙二胺四乙酸，即EDTA)使金属离子形成可溶性络合物，防止沉淀的产生。高压蒸汽灭菌一般使培养基 pH降低， 应在配制培养基时加以调节。

几种液体培养基配方牛肉膏蛋白胨液体培养基(又称营养肉汤,用于培养细菌)
成分:牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g,蒸馏水(或去离子水)1000mL,pH7.4士0.2.
制法:将各成分溶解于水中，于20~25℃条件下以1mol/LNaOH溶液用pH计校正pH7.4,分装三角瓶(装量以三角瓶容积的1/2~2/3为宜)，或试管(分装量以试管高度的1/4左右为宜),0.1MPa灭菌15~20min后备用。1

LB液体培养基(用于培养细菌,常在分子生物学中应用)
成分:胰蛋白陈10g、酵母膏5g.NaCl10g、琼脂15~20g,双蒸馏水1000mL，pH7.0

制法:将各成分溶于1000mL双蒸馏水中，用1mol/LNaOH(约1mL)调节pH,分装后，0.IMPa灭菌15-20min。必要时也可在培养基中加入0.1%葡萄糖。半固体培养基加入0.4%-0,5%琼脂。

豆芽汁液体培养基(用于培养酵母菌和霉菌及霉菌原生质体融合)
成分:豆芽汁1000mL、磷酸氢二铵1g.KCl 0.2g、 MgSO4 .7H2O,0.2g.pH6.2-6.4.

制法:将固体成分于豆芽汁中加热溶解，校正pH,如果配制固体培养基再加人15-20g琼脂,分装三角瓶或试管,0.07MPa灭菌20min
豆芽汁制备:将黄豆或绿豆用水浸泡一夜，置于室温(20℃左右)下，上覆盖湿布,每天冲洗1~2次，弃去腐烂不发芽者，待发芽至1寸左右即可。将黄豆芽或绿豆芽200g洗净，在1000mL水中煮沸30min，纱布过滤得豆芽汁,补足水分至1000mL,此即为20%的豆芽汁。

化学分类天然培养基指一类利用动、植物或微生物体包括其提取物制成的培养基。如牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基等。

组合培养基又称为合成培养基或综合培养基，是一类按微生物的营养要求精确设计后用多种高纯化学试剂配制成的培养基。如葡萄糖铵盐培养基、淀粉硝酸盐培养基等。

半组合培养基指一类主要以化学试剂配制，同时还加有某种或某些天然成分的培养基。例如，马铃薯蔗糖培养基。

本词条内容贡献者为:

张磊 - 副教授 - 重庆师范大学