一种海洋氧化短杆菌碱性蛋白酶的提取方法

• 摘要：

  一种从海洋氧化短杆菌(Brevibacterium oxydans)发酵液中提取碱性蛋白酶的方法,包括硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Superdex G-200凝胶柱层析、PEG20000浓缩.本发明的优点是方法简单、回收率高且酶的活性高,提纯得到的酶具有良好的热稳定性pH耐受性.为洗涤、制革、丝绸等工业中碱性蛋白酶的应用提供新酶源.

• 专利类型：

  发明专利

• 申请/专利号：

  CN200710008894.9

• 申请日期：

  2007.04.26

• 公开/公告号：

  CN101294151

• 公开/公告日：

  2008-10-29

• 发明人：

  谢联辉 林白雪 吴祖建 林奇英 黄志强

• 申请人：

  福建农林大学

• 主分类号：

  C12N9/52(2006.01)I,C,C12,C12N,C12N9

• 分类号：

  C12N9/52(2006.01)I,C,C12,C12N,C12N9,C12N9/52

• 主权项：

  1、一种从海洋氧化短杆菌(Brevibacterium oxydans)发酵液中提取碱性蛋白酶的方法,其特征在于由以下方法组成:(1)在发酵上清液中边搅拌边加入硫酸铵至终浓度为40％-50％,搅拌0.5h后,4℃,10000r·min-1离心20min,收集沉淀物A;(2)将沉淀物A用0.01mol·L-1PBS溶液悬浮,然后装入透析袋,用0.01mol·L-1PBS溶液透析除盐,4℃放置12小时;(3)倒去透析袋外的溶液,在透析袋外放PEG20000,4℃放置,浓缩至1/5体积,得到粗酶样;(4)将粗酶样上DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱,用0.01-0.1mol·L-1 PBS,以流速0.1-0.3mL·min-1洗脱,收集洗脱液,检测并合并有酶活性的洗脱液,获得洗脱液A;(5)将洗脱液A上Superdex G-200凝胶柱层析,0.01-0.1mol·L-1PBS洗脱,流速0.1-0.3mL·min-1.收集洗脱液,检测并合并有酶活性的洗脱液,获得洗脱液B;(6)将洗脱液B用PEG20000浓缩至1/5体积.