一种茶树组培再生体系建立的方法

• 摘要：

  本发明涉及一种茶树组培再生体系建立的方法.具体操作步骤如下:1.愈伤组织的诱导,2.愈伤组织的继代和增殖,3.不定芽的诱导,4.不定芽的增殖,5.壮苗,6生根和移栽.本发明具有两步增殖阶段,即愈伤组织增殖和不定芽增殖.愈伤组织增殖方式,具有增殖方式简单、遗传稳定的特点,实验发现在继代4年后,细胞的活力和分化能力没有明显变化;而且愈伤组织由于酚类物质含量较低,可以成为遗传转化的对象.因此本技术为茶树遗传转化体系的建立奠定了坚实的实验基础.

• 专利类型：

  发明专利

• 申请/专利号：

  CN201210227942.4

• 申请日期：

  2012.07.04

• 公开/公告号：

  CN102726296A

• 公开/公告日：

  2012-10-17

• 发明人：

  高丽萍 王婕 刘亚军 贡年娣

• 申请人：

  安徽农业大学

• 主分类号：

  A01H4/00(2006.01)I,A,A01,A01H,A01H4

• 分类号：

  A01H4/00(2006.01)I,A01G31/00(2006.01)I,A,A01,A01H,A01G,A01H4,A01G31,A01H4/00,A01G31/00

• 主权项：

  一种茶树组培再生体系建立的方法,其特征在于包括以下操作步骤:1.1愈伤组织的诱导采摘9月下旬生理成熟的茶籽作为茶树再生体系的原材料,即外植体;取茶籽5~10颗,将绿色的外壳剥去,用浓度75%的乙醇浸泡30秒,用无菌水洗3~4次;再用浓度0.1%的升汞溶液浸泡10分钟,用无菌水洗3~4次;在超净条件下剥去种皮,选取完整的、带有胚的剥去种皮的茶树籽接种于普通B5培养基上,接种量为每40毫升接3~4颗;培养2周,有茶树愈伤组织长出;所述普通B5培养基中加入了二氯苯氧基乙酸和6?糠氨基嘌呤,其中二氯苯氧基乙酸的加入量为2.5mg/L,6?糠氨基嘌呤的加入量为0.5mg/L;1.2愈伤组织的继代和增殖将茶树愈伤组织切下,并切成直径6~10毫米愈伤组织块,培养于普通B5培养基上,接种量每40毫升接5~10块;培养条件为黑暗、温度为25~28度;每21天更换一次新鲜的普通B5培养基;培养3周,得到鲜重可以增殖为原来的1.8~2.2倍的增殖愈伤组织;在此条件下,该愈伤组织可以稳定继代4年;1.3不定芽的诱导,将增殖愈伤组织接种到不定芽诱导培养基上,接种量每40毫升接直径6~10毫米大小的愈伤组织5~10块;培养条件为12小时光照和12小时黑暗交替,温度为25~28度,光强为3000~6000勒克司;每4周更换一次不定芽诱导培养基;培养到第3周,有部分愈伤组织转绿;培养到第4周,不定芽的诱导率为15.71%,培养到2个月,诱导率上升为24.29%,培养到4个月,诱导率高达65.71%;所述不定芽诱导培养基以MS培养基为基础,加入吲哚丁酸和6?苄基腺嘌呤,其中吲哚丁酸的加入量为0.1mg/L,6?苄基腺嘌呤的加入量为2.5mg/L;1.4不定芽的增殖将新诱导出的不定芽切下,栽插到不定芽增殖培养基上,栽插量每100毫升接1~3棵;培养条件为12小时光照和12小时黑暗交替,温度为27度,光强为4000勒克司;培养3周,大量的丛生芽长出;在此条件下,可以不断增殖不定芽;所述不定芽增殖培养基以MS培养基为基础,加入吲哚丁酸和苯基噻二唑基脲,其中吲哚丁酸的加入量为?0.1mg/L、苯基噻二唑基脲的加入量为0.015mg/L;1.5壮苗将丛生芽切下,栽插到壮苗培养基上,栽插量每100毫升接1~3棵;?培养条件为12小时光照和12小时黑暗交替,温度为27度,光强为4000勒克司;培养3周,丛生芽平均可生长2~3厘米,得到茶苗;所述壮苗培养基以MS培养基为基础,加入吲哚丁酸,吲哚丁酸的加入量为0.3mg/L;1.6生根和移栽选取苗高达5厘米以上的粗壮无根的茶苗,直接栽入生根土壤中,培养条件为12小时光照和12小时黑暗交替,温度为25度,光强为3000~6000勒克司;移栽初期,每日三次进行叶面喷水;培养8周,存活率为41.64%,所有存活的茶苗均生根,所述生根土壤配方为丹麦品氏托普泥炭土:蛭石按质量比1:1均匀混合.