基于量子点的CA125免疫层析试纸条的制备方法

• 摘要：

  本发明涉及一种基于量子点的CA??125免疫层析试纸条的制备方法;将量子点与CA??125抗体偶联制备成荧光探针QDs@Ab1,QDs@Ab1、CA??125和包埋在试纸条的另一种CA??125抗体(Ab1')通过抗体抗原之间的作用,形成一种类似夹心的结构,建立Log(T/C)与CA??125浓度的相对应关联公式,将待测样本检测获得的T线与C线数值通过计算出其CA??125的浓度,实现定性定量地检测乳腺癌的肿瘤标志物CA??125.抗原浓度与探针荧光强度正相关,可定性定量检测CA??125;整个检测过程,成本低廉且操作简便,适合高危人群的社区肿瘤筛选,建立一种肿瘤检测的新方法;适合于产业化生产.

• 专利类型：

  发明专利

• 申请/专利号：

  CN201610814365.7

• 申请日期：

  2016.09.10

• 公开/公告号：

  CN106442977A

• 公开/公告日：

  2017-02-22

• 发明人：

  常津 张健 宫晓群 武玉东 姚颖异

• 申请人：

  天津大学

• 主分类号：

  G01N33/558(2006.01)I,G,G01,G01N,G01N33

• 分类号：

  G01N33/558(2006.01)I,G01N33/574(2006.01)I,G,G01,G01N,G01N33,G01N33/558,G01N33/574

• 主权项：

  基于量子点的CA??125免疫层析试纸条的制备方法;其特征是步骤如下:(1)将水溶性量子点与1??(3??二甲氨基丙基)??3??乙基碳二亚胺盐酸盐加入到反应器,然后向反应器中加入Tris??HCl缓冲液,在旋转混合架上活化量子点的羧基;(2)反应结束后,采用离心分离进行纯化,用Tris??HCl缓冲液清洗以除去未反应的1??(3??二甲氨基丙基)??3??乙基碳二亚胺盐酸盐,得到活化的水溶性量子点;(3)将活化的量子点、CA??125单克隆抗体按照摩尔比为1:40~80比例混合于Tris??HCl缓冲液中,涡旋仪上旋转使其混匀,将混合溶液置于旋转混合架上,室温下反应2~3小时;(4)反应结束后,采用离心分离进行纯化,用Tris??HCl缓冲液清洗除去游离的抗体和1??(3??二甲氨基丙基)??3??乙基碳二亚胺盐酸盐,得到荧光探针QDs@Ab1,然后将产物分散在含有1~5％牛血清白蛋白的Tris??HCl缓冲液中,4℃静置过夜;(5)将另一种CA??125抗体以及羊抗鼠IgG用Tris??HCl缓冲液稀释到1~2mg/mL,用点样仪喷于硝酸纤维素膜上以形成T线和C线;(6)将样品垫和结合垫进行预处理;(7)用含1％的BSA、1％的PEG??4000、0.1％的Tween??20、1％的蔗糖的Tris??HCl缓冲液作为稀释液,对封闭后的水溶性量子点??CA??125单克隆抗体(QDs@Ab1)混合液进行稀释,稀释倍数为5倍,并将稀释后的溶液均匀滴加在预处理后的结合垫上,静置5min,并随后于37℃恒温干燥箱中至完全干燥,得到终处理的结合垫,封袋置于4℃保存备用;(8)将预处理的样品垫,终处理的结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫按顺序固定于单面塑胶板上,各个垫和膜之间相互重叠1~3mm,完成试纸条的组装.