一种家蚕中肠蛋白亚细胞组份的分离方法

• 摘要：

  本发明公开了一种家蚕中肠蛋白亚细胞组份的分离方法.包括家蚕中肠线粒体、微粒体和胞浆酶源的分离提取.采用本发明的方法分离家蚕中肠总蛋白,得到较好的分离效果.经SDS‑PAGE,2‑DE以及质谱分析验证,可以证明家蚕中肠亚细胞组份离效果较高,且没有出现污染情况.因此,经过分离后的家蚕中肠亚细胞组份蛋白,可用于其他蛋白水平分析,以提高实验分辨率,增加结果可信度可以高效的分离出家蚕中肠的三种亚细胞组份.

• 专利类型：

  发明专利

• 申请/专利号：

  CN201611089725.8

• 申请日期：

  2016.12.01

• 公开/公告号：

  CN106749500A

• 公开/公告日：

  2017-05-31

• 发明人：

  徐家萍 刘明辉 王学杨

• 申请人：

  安徽农业大学

• 主分类号：

  C07K1/14(2006.01)I,C,C07,C07K,C07K1

• 分类号：

  C07K1/14(2006.01)I,C,C07,C07K,C07K1,C07K1/14

• 主权项：

  一种家蚕中肠蛋白亚细胞组份的分离方法,其特征在于,具体步骤如下:A、首先将家蚕中肠组织液氮研磨成粉,加入适量的提取液,先超声振荡20‑30 s,在冰上放置2‑3 min,然后重复上述过程2‑3次混匀,于冰上匀浆静置28‑32 min,然后经1000 rpm离心5‑6 min,去除沉淀后,得到悬浮液为家蚕中肠总蛋白; B、将步骤(A)获得的悬浮液在4 ℃下,转速1000 rpm ,离心9‑10 min后,得到的沉淀,即为线粒体蛋白,离心所得的上清液,备用 ; C、向步骤(B)离心获得的上清中加入等体积的16 mM CaCl2溶液,混匀后置于0‑4 ℃ 的环境下静置5‑6 min,然后在4 ℃下,12000 rpm ,离心9‑10 min后,得到的沉淀为微粒体蛋白; D、步骤(C)获得的上清与预冷丙酮按照1:3.5‑4.5的体积进行混合,混匀后在‑18℃~‑22℃的环境下放置过夜,再经4 ℃,12000 rpm, 离心10 min后去上清,沉淀即为胞浆酶源蛋白.