活性污泥中不同电子受体聚磷菌的分离鉴定方法

• 摘要：

  一种活性污泥系统中不同电子受体聚磷菌的分离鉴定方法,属于污水生物处理技术领域.本发明可以分离污水处理厂活性污泥系统中不同电子受体聚磷菌的DNA,并采用分子生物学方法在基因水平上分析菌群特点.采用¹³C‑乙酸钠作为实验组碳源,¹²C‑乙酸钠作为对照组碳源,厌氧释磷培养2小时,分别以氧气、硝酸盐和亚硝酸盐为电子受体,好氧或缺氧吸磷培养3小时,共培养8个周期,超高速离心分离纯化得到不同密度层级的DNA样品,用分子生物学方法测定分析不同电子受体时聚磷菌的菌群结构.本发明提供了一种分析不同聚磷菌所需电子受体的方法,为实际污水处理厂强化反硝化除磷过程提供理论支撑.

• 专利类型：

  发明专利

• 申请/专利号：

  CN201710306537.4

• 申请日期：

  2017.05.04

• 公开/公告号：

  CN107142306A

• 公开/公告日：

  2017-09-08

• 发明人：

  曾薇 郭瑜 李宁 彭永臻

• 申请人：

  北京工业大学

• 主分类号：

  C12Q1/68(2006.01)I,C,C12,C12Q,C12Q1

• 分类号：

  C12Q1/68(2006.01)I,C12Q1/04(2006.01)I,C,C12,C12Q,C12Q1,C12Q1/68,C12Q1/04

• 主权项：

  一种活性污泥中不同电子受体聚磷菌的分离鉴定方法,其特征在于,过程如下:1)按照微生物在污水生物处理系统中的生长环境,配制5种基质,分别为1号基质含有¹³C‑乙酸钠、2号基质含有¹²C‑乙酸钠、3号基质含有磷酸盐、4号基质含有磷酸盐和硝酸盐、5号基质含有磷酸盐和亚硝酸盐;2)取生物处理反应器中的污泥混合液,用蒸馏水淘洗离心三次,将离心后的污泥定容至淘洗前体积的一半;3)取6个150mL的锥形瓶,标号1‑6,分别为以¹³C‑乙酸钠为碳源,氧气为电子受体作为1号;以¹³C‑乙酸钠为碳源,硝酸盐为电子受体作为2号;以¹³C‑乙酸钠为碳源,亚硝酸盐为电子受体作为3号;以¹²C‑乙酸钠为碳源,氧气为电子受体作为4号;以¹²C‑乙酸钠为碳源,硝酸盐为电子受体作为5号;以¹²C‑乙酸钠为碳源,亚硝酸盐为电子受体作为6号;4)在150mL的锥形瓶中加入50mL淘洗并定容的污泥;5)在1‑3号锥形瓶中加入50mL 1号基质,4‑6号中加入50mL 2号基质,保证锥形瓶中反应温度与生物处理反应器中一致,搅拌反应2小时;62小时候后静置去掉锥形瓶中的上清液,淘洗污泥,转移污泥至对应锥形瓶,并将混合液定容至50mL;7)在1号和4号锥形瓶中加入3号基质,在2号和5号锥形瓶中加入4号基质,在3号和6号锥形瓶中加入5号基质,并对1号和4号锥形瓶曝气,反应3小时;8)反应结束后,静置锥形瓶,去掉上清液,淘洗污泥,转入对应锥形瓶,并定容至50mL;9)按5)‑8)步骤,每周期厌氧反应2小时,好氧或缺氧反应3小时,共进行8个周期;10)反应后的污泥冷冻干燥,并提取DNA;11)采用稳定同位素核酸探针技术,离心分离并纯化DNA,得到不同浮力密度的DNA样品;12)将含¹³C‑乙酸钠的三组DNA样品与含¹²C‑乙酸钠的三组DNA样品作比较,得到重浮力密度层级的DNA,采用PCR技术、QPCR技术、高通量测序技术分析不同浮力密度层级中的聚磷菌,比较以不同电子受体培养的聚磷菌的群落结构.