一种快速、准确、重复性好的口蹄疫疫苗抗原146S测定方法

• 摘要：

  本发明公开了一种快速、准确、重复性好的口蹄疫疫苗抗原146S测定方法.该方法采用分子量分离范围为2*10⁴-1*10⁷Da的尺寸排阻高效液相色谱柱,在高效液相色谱仪上对被检测的样品进行色谱分离.色谱仪操作压力为1.0-2.5MPa,色谱柱内的流速为0.5-1.0ml/min,流动相为含0.1M硫酸钠的磷酸缓冲液(pH7.0-7.5),柱温为15-25℃.采用紫外和激光检测器在尺寸排阻高效液相色谱柱出口检测流出液的光学信号,并经过高效液相色谱仪的计算机软件系统分析样品的出峰面积.通过对不同浓度的146S标准品紫外吸收峰与其浓度的关系,建立吸收峰面积和146S浓度的标准曲线.再对被测样品通过尺寸排阻高效液相色谱柱进行色谱分离.测量其紫外吸收峰面积,根据前述的标准曲线,获得被测样品中的146S浓度.

• 专利类型：

  发明专利

• 申请/专利号：

  CN201510025994.7

• 申请日期：

  2015.01.19

• 公开/公告号：

  CN104634891A

• 公开/公告日：

  2015-05-20

• 发明人：

  苏志国 张松平 马光辉 杨延丽 张焱

• 申请人：

  中国科学院过程工程研究所

• 主分类号：

  G01N30/02(2006.01)I,G,G01,G01N,G01N30

• 分类号：

  G01N30/02(2006.01)I,G,G01,G01N,G01N30,G01N30/02

• 主权项：

  一种采用尺寸排阻高效液相色谱柱测定口蹄疫疫苗抗原146S的方法,其特征包括以下步骤:(1)将尺寸排阻高效液相色谱柱连接在高效液相色谱仪上,以pH大于7的缓冲溶液作为流动相,打开高效液相色谱仪的泵送系统和紫外检测系统,对尺寸排阻高效液相色谱柱进行冲洗和恒温,注意排出系统内任何残留的气泡.(2)标准曲线的绘制:将146S纯品用缓冲溶液配置成不同浓度的标准溶液样品,其样品数量应该大于3个,浓度范围为0.2‑60μg/ml.取标准溶液样品进样量100μl,按照高效液相色谱仪的操作对尺寸排阻高效液相色谱柱进样分析,洗脱液采用含0.1M硫酸钠的磷酸缓冲液(pH7.0‑7.5),流速:0.5‑1.0ml/min;色谱柱流出液在紫外波长下进行检测.对抗原的吸收峰进行积分得到峰面积,与标准品中146S的浓度建立线性回归方程.(3)待测样品的测定:将待测样品通过系统向尺寸排阻高效液相色谱柱进样,采用与(2)同样的洗脱液和紫外波长检测,对抗原的吸收峰进行积分得到峰面积,根据(2)中建立的146S浓度与峰面积的线性回归方程,算得待测样品中146S的浓度.