基于离体枝条的农药对苹果腐烂病室内抑菌活性测定方法

• 摘要：

  本发明涉及植物保护技术领域,具体涉及一种基于离体枝条的农药对苹果腐烂病室内抑菌活性测定方法,在室内采用离体苹果枝条,模拟田间苹果腐烂病发病过程,以接近田间实际防效鉴定的方式对防控苹果腐烂病的药剂进行抑菌活性测定和有效使用浓度确定.本发明提供的苹果腐烂病药剂抑菌活性鉴定方法,在操作上快速、客观、简单易行,成本低廉,既能用于苹果腐烂病有效药剂的快速和大通量筛选,又能对药剂的作用方式进行鉴定和评价.

• 专利类型：

  发明专利

• 申请/专利号：

  CN202010286166.X

• 申请日期：

  2020.04.13

• 公开/公告号：

  CN111424068A

• 公开/公告日：

  2020-07-17

• 发明人：

  周宗山 鄢海峰 冀志蕊 张俊祥 王娜 乔壮

• 申请人：

  中国农业科学院果树研究所

• 主分类号：

  C12Q1/18(2006.01),C,C12,C12Q,C12Q1

• 分类号：

  C12Q1/18(2006.01),C12N3/00(2006.01),C12N1/14(2006.01),A01G7/06(2006.01),C12R1/645(2006.01),C,A,C12,A01,C12Q,C12N,A01G,C12R,C12Q1,C12N3,C12N1,A01G7,C12R1,C12Q1/18,C12N3/00,C12N1/14,A01G7/06,C12R1/645

• 主权项：

  1.基于离体枝条的农药对苹果腐烂病室内抑菌活性测定方法,其特征在于,所述的农药包括保护性杀菌剂和治疗性杀菌剂; 基于保护性杀菌剂,具体步骤如下: 1)苹果腐烂病病原菌孢子的获取 田间采集苹果枝条,截取长度为8±0.5cm的枝段,取3~5枝装入三角瓶中并加入3~4ml蒸馏水,湿热灭菌备用,将苹果腐烂病菌饼接种于灭菌后的枝条上,25℃光照培养15~30d,待产孢备用,待离体苹果枝条上形成子实体并涌出黄色分生孢子角时,用无菌接种针挑取分生孢子,并用无菌水制成接种用孢子悬浮液; 2)枝条处理 田间采集健康且长势一致的苹果枝条,截取长度为25±2cm,横截面直径为1~2cm的枝段,用自来水和无菌水交替冲洗枝条,去除枝条表面污渍;用脱脂棉蘸取75％酒精对枝条表面进行消毒并蜡封两端;处理好的枝条置于超净工作台晾干;用打孔器均匀间隔打孔4~6个/枝条,并除去孔内外表皮,留少量韧皮部;每孔滴加浓氨水对枝条进行烫伤处理,待浓氨水晾干后备用; 3)保护性杀菌剂对发病枝条的作用 将保护性杀菌剂用灭过菌的刷子涂抹在步骤2)浓氨水处理过的打孔部位,待晾干后,每孔处滴加孢子液,在打孔处涂抹无菌水然后滴加孢子液作为对照组,保湿培养; 4)统计发病数并计算发病率 枝条保湿培养7天后,测量并统计枝条发病数,计算出接种孔发病率,进一步计算出保护性杀菌剂的抑菌活性,以评价保护性杀菌剂对发病枝条的保护效果; 基于治疗性杀菌剂,具体步骤如下: 1)苹果腐烂病病原菌的培养 采用PDA培养基平板培养苹果腐烂病病原菌,25℃暗培养5d得到苹果树腐烂病菌菌饼待用; 2)枝条接菌处理 田间采集健康且长势一致的苹果枝条,截取长度为25±2cm,横截面直径为1~2cm的枝段,用自来水和无菌水交替冲洗枝条,去除枝条表面污渍;用脱脂棉蘸取75％酒精对枝条表面进行消毒并蜡封两端;处理好的枝条置于超净工作台晾干;用打孔器均匀间隔打孔4~6个/枝条,并除去孔内外表皮,留少量韧皮部;每孔滴加浓氨水对枝条进行烫伤处理,待浓氨水晾干后备用; 3)治疗性杀菌剂对发病枝条的作用 在枝条打孔部位接种步骤1)所述的培养5d的苹果树腐烂病菌菌饼,将枝段放入垫有湿纱布的搪瓷盘中;用保鲜膜覆盖保湿,置于25℃的恒温箱中保湿培养24h,使病原菌与寄主之间建立寄生关系;去掉菌饼,在打孔处涂抹治疗性杀菌剂,以只在打孔处涂抹无菌水作为对照组,25℃保湿培养7d,通过测量病斑扩展长度,计算治疗性杀菌剂的抑菌活性,以评价治疗性杀菌剂对发病枝条的治疗效果; 4)发病情况统计 测量并统计接种孔发病数以及各发病孔病斑长度,根据记录的枝条病斑长度,按公式: 采用"十字交叉法"测量病疤长度和短径,并计算病疤面积; 病疤面积＝1/4*π*长径*短径 病斑扩展抑制率＝(对照病疤面积－处理病疤面积)/(对照病疤面积－菌饼面积)*100％,所述的对照病疤面积是以无菌水处理作为对照参考; 数据采用Excel软件计算EC50和标准误差,并采用SPSS 19.0软件和Duncan氏新复极差法进行方差分析(P＜0.05). 2.根据权利要求1所述的基于离体枝条的农药对苹果腐烂病室内抑菌活性测定方法,其特征在于,基于保护性杀菌剂,步骤1)所述的无菌水制成接种孢子悬浮液的浓度为1*106/ml. 3.根据权利要求1所述的基于离体枝条的农药对苹果腐烂病室内抑菌活性测定方法,其特征在于,基于保护性杀菌剂,步骤2)所述的打孔器为4mm打孔器. 4.根据权利要求1所述的基于离体枝条的农药对苹果腐烂病室内抑菌活性测定方法,其特征在于,基于保护性杀菌剂,步骤2)所述的浓氨水加入量为每孔5μL. 5.根据权利要求1所述的基于离体枝条的农药对苹果腐烂病室内抑菌活性测定方法,其特征在于,基于保护性杀菌剂,步骤3)所述的孢子液滴加量为每孔10μL. 6.根据权利要求1所述的基于离体枝条的农药对苹果腐烂病室内抑菌活性测定方法,其特征在于,所述的保护性杀菌剂包括甲基硫菌灵、菌毒清、代森铵;所述的治疗性杀菌剂包括甲基硫菌灵和丙环唑. 7.根据权利要求1所述的基于离体枝条的农药对苹果腐烂病室内抑菌活性测定方法,其特征在于,所述的苹果腐烂病菌为中国农业科学院果树研究所果树病害组从苹果资源圃内分离保存的单孢菌株,黑腐皮壳菌(Valsa mali).