利用Nile red进行线虫染色检测痕量BPA方法

• 摘要：

  利用Nile red进行线虫染色检测痕量BPA方法,本发明涉及利用Nile red进行线虫染色检测痕量BPA方法,本发明的目的是为了解决现有方法检出限低的问题.本发明方法为:一、制备混合溶液A;二、将Nile red溶混合溶液A中;三、制备混合溶液C;四、在培养皿中加入混合溶液C和待测液体;五、处理BC10067线虫突变体虫卵;六、配置线虫培养基;七、处理线虫培养基;八、培养处理BC10067线虫突变体虫卵,长至成虫后,进行Nile Red发光强度检测;若发光强度大于正常生长线虫的20％,则待测液体中含有内分泌干扰物BPA.本发明实现了微量BPA的检测.本发明属于BPA检测领域.

• 专利类型：

  发明专利

• 申请/专利号：

  CN201610227481.9

• 申请日期：

  2016.04.13

• 公开/公告号：

  CN105891177A

• 公开/公告日：

  2016-08-24

• 发明人：

  王云彪

• 申请人：

  中国科学院东北地理与农业生态研究所

• 主分类号：

  G01N21/64(2006.01)I,G,G01,G01N,G01N21

• 分类号：

  G01N21/64(2006.01)I,G,G01,G01N,G01N21,G01N21/64

• 主权项：

  利用Nile red进行线虫染色检测痕量BPA方法,其特征在于该方法按如下步骤进行:一、称取8.01g NaCl、0.2g KCl、1.78gNa₂HPO₄·2H₂O和0.27gKH₂PO₄,混合后用蒸馏水定容至1000mL,再放入高压蒸汽灭菌锅中121℃灭菌18~22min,取出冷却后调节pH值为7.4,得到混合溶液A;二、称取4~6.5μg Nile red,溶于100ml混合溶液A中,得到混合溶液B;三、称取13.6g KH₂PO₄和1.8g KOH,混合后加蒸馏水定容至100mL,再调节pH值为6.0,得到混合溶液C;四、在培养皿中加入10mL混合溶液C,然后加入100μL待测液体,得到培养皿A;五、将8~12个BC10067线虫突变体虫卵加入培养皿A中,浸泡4h,得到处理后的BC10067线虫突变体虫卵;六、称取4~6g酵母粉、8~10g蛋白胨、8~10g琼脂、1~2g NaCl和1~2g KCl,混合后用蒸馏水定容至1000mL,放入高压蒸汽灭菌锅中121℃灭菌18~22min,转移培养皿中获得线虫培养基;七、向线虫培养基中均匀涂入1~1.5ml混合溶液B,然后接入浓度为1*10⁹个/mL~2*10⁹个/mL大肠杆菌OP50菌液0.8~1.2mL,再在37℃培养8~12h,得到处理后的线虫培养基;八、将步骤五处理后的BC10067线虫突变体虫卵接入步骤七的处理后的线虫培养基中,长至成虫后,用zeiss荧光显微镜进行虫体Nile Red发光强度检测;若发光强度大于正常生长线虫的20％,则待测液体中含有内分泌干扰物BPA,即完成利用Nile red进行线虫染色检测痕量BPA方法.