Leifson氏法

Leifson氏法分为两种不同类型的方法，都有Leifson命名。分别为荚膜染色法、鞭毛染色法。

荚膜是包围在细菌细胞外面的一层粘液性物质，其主要成分是多糖类，不易被染色，故常用衬托染色法，即将菌体和背景着色，而把不着色且透明的荚膜衬托出来。荚膜很薄，易变形，因此，制片时一般不用热固定。

荚膜染色主要用于炭疽杆菌病料的荚膜检查。因为炭疽杆菌荚膜系由d-谷氨酸组成的多肽所构成，而菌体的主要成分则为核蛋白，因二者着色力不同，染色水洗后，则可把荚膜上一部分染料冲洗掉，颜色变淡，故显微镜检查时，在着色较深的菌体周围看到一圈呈淡紫色的膜，即荚膜。又因碱性美兰是一种多染性染料，故菌体染为蓝色，荚膜则染成淡蔷薇色。

简介Leifson氏法分为两种不同类型的方法，都有Leifson命名。分别为荚膜染色法、鞭毛染色法。1

荚膜染色法原理荚膜是包围在细菌细胞外面的一层粘液性物质，其主要成分是多糖类，不易被染色，故常用衬托染色法，即将菌体和背景着色，而把不着色且透明的荚膜衬托出来。荚膜很薄，易变形，因此，制片时一般不用热固定。

荚膜染色主要用于炭疽杆菌病料的荚膜检查。因为炭疽杆菌荚膜系由d-谷氨酸组成的多肽所构成，而菌体的主要成分则为核蛋白，因二者着色力不同，染色水洗后，则可把荚膜上一部分染料冲洗掉，颜色变淡，故显微镜检查时，在着色较深的菌体周围看到一圈呈淡紫色的膜，即荚膜。又因碱性美兰是一种多染性染料，故菌体染为蓝色，荚膜则染成淡蔷薇色。1

荚膜染色法1.涂片：在洁净无油腻的玻片中央放一小滴蒸馏水（或用接种环挑1-2滴水），用无菌的接种环挑取少量菌种与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜，涂布面积约1cm2 。

2.干燥：涂片在室温下使其自然干燥，也可以小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。

3.固定：手执玻片一端，有菌膜的一面朝上，通过微火三次（手指触摸反面不烫手为宜），待玻片冷却后，再加染色液。

4.染色：玻片置于玻片搁架上，加适量（以盖满菌膜为度）草酸铵结晶紫（或石炭酸复红染液）于菌膜部位，染色1-2min。

5.水洗：斜置载玻片，在自来水龙头（或洗瓶）下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。

6.干燥：自然干燥或用吸水纸吸去涂片上的水，用吸水纸时切勿将菌体擦掉。

7.镜检：用高倍镜和油镜观察并绘细菌形态并绘图于记录表中。1

鞭毛染色法原理鞭毛的有无、多少和着生方式是细菌鉴定中的重要指标。在一般情况下，细菌的鞭毛因为太细(直径为10～20nm)，故普通光学显微镜下无法观察。但通过特殊染色方法使染料沉积在鞭毛上使其加粗，就可克服上述困难。1

鞭毛染色法配制染料KAl(SO4)2饱和水溶液20ml，20%鞣酸10ml，蒸馏水10ml，95%乙醇15ml，碱性复红(95%乙醇饱和溶液)3ml。依次加人后充分混匀，放入试剂瓶中盖紧(可保存1周)。染色操作：制备良好的涂片；滴加染液，30℃左右放置10Min；自来水洗；在室温下用硼砂美蓝(美蓝0.18、硼砂1g加蒸馏水100ml配成)复染(也可省略此步)；自来水洗净、气干和镜检。结果鞭毛红色，细胞蓝色。1

本词条内容贡献者为:

贺会强 - 博士 - 西北农林科技大学