核酸分子探针

用放射性同位素或荧光物质标记的特异DNA或RNA分子，通过分子杂交移术检测与之互补的核苷酸顺序的技术。

核酸分子探针的制备方法有以下几种：

缺口移位标记

DNA水解酶能够使双链DNA分子产生缺口。DNA聚合酶能将缺口从5'-3'方向扩大，同时将5'端的核苷酸切除，此酶还同时具有5'-3'聚合功能，在有4种单核苷酸(dNTP)的反应系统中将切去的核苷酸补上。

简介用放射性同位素或荧光物质标记的特异DNA或RNA分子，通过分子杂交移术检测与之互补的核苷酸顺序的技术。1

制备方法核酸分子探针的制备方法有以下几种：

缺口移位标记DNA水解酶能够使双链DNA分子产生缺口。DNA聚合酶能将缺口从5'-3'方向扩大，同时将5'端的核苷酸切除，此酶还同时具有5'-3'聚合功能，在有4种单核苷酸(dNTP)的反应系统中将切去的核苷酸补上。缺口沿着DNA的另一条链位移，同时有放射性的核苷酸就会掺入DNA分子中，成为有高比放性的DNA探针。一般单核苷酸标记的掺入量30%，比放性可达108 cpm/μg DNA。

末端标记T4多聚核苷酸激酶能催化γ一dNTP的γ磷转移至DNA或RNA5'-OH末端的反应。因此常用γ-32P-dNTP标记DNA或RNA。为了增高比放性，可将DNA或RNA大分子水解成适当长度的片段，以便有较多的末端被标记。

化学标记DNA在pH5的含放射性碘(125I)

的水溶液中加热或在三氯化铊、催化可被碘化。碘原子通过形成5-碘胞嘧啶，以稳定的共价键掺入DNA分子中。碘与胸腺嘧啶和腺嘌呤不反底与鸟嘌呤有微弱的反应。碘化后的DNA分子性质(如转化、复性等)不改变。DNA单链的95%以上的胞嘧啶可被碘化。此法也可用于标记RNA,只不过有少量的5-碘尿嘧啶和大量的尿嘧啶水化物形成。反应条件与单链DNA相似，只是pH在中性为宜，以避免腺嘌呤和RNA链的断裂。

生物素标记核酸探针除可用同位素标记外，还可用生物素标记。带有生物素的尿嘧啶能掺入到核酸分子中。探针杂交后形成的杂种分子与链抗生素蛋白-生物素-辣根过氧化物酶复合物作用产生绿色荧光，很易检测。1

优点核酸分子探针广泛用于分子遗传学研究。如索森和诺森杂交技术是筛选和分离基因的重要方法(见核酸分子杂交)。上述方法中以缺口移位标记法最为常用。末端标记法和化学标记法更适用于RNA，由于生物素标记无放射性污染，又无半衰期限制，操作简便、价格便宜，所以应用广泛。1

本词条内容贡献者为:

吴俊文 - 博士 - 厦门大学