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科技工作者之家 2019-12-22
来源:BioArt
外泌体是从活细胞中分泌的纳米级囊泡,能够在细胞间传递蛋白质、mRNA、miRNA等遗传信息。基于外泌体天然的结构和功能特征,其具有天然的靶向性,同时又不会引起促炎反应和免疫反应,因此成为药物递送的理想选择。但是从细胞中分离的外泌体产量少、mRNA的装载效率低以及递送效率差仍然是现阶段研究中亟待解决的问题【1,2】。
2019年12月16日,吉林大学滕乐生教授与美国俄亥俄州立大学L. James Lee教授、德州大学安德森癌症中心Betty Y. S. Kim教授合作在Nature Biomedical Engineering杂志上发表研究论文Large-scale generation of functional mRNA encapsulating exosomes via cellular nanoporation(文章的第一作者为杨照罡博士及Junfeng Shi博士),成功开发了一种细胞纳米穿孔技术(Cellular nanoporation,CNP),使用光刻蚀和深反应离子刻蚀相结合的工艺,制成了含纳米孔道的生物芯片,加载瞬时电脉冲后,质粒从缓冲液穿梭到附着在生物芯片的细胞中,以刺激细胞产生和释放外泌体,同时增加内源性mRNA的转录;以此为基础对外泌体进行载药及修饰,修饰后的外泌体在小鼠脑胶质瘤体内、外治疗中均取得较好效果(图1)。
图1 CNP法制备功能性外泌体及其在脑胶质瘤中的应用流程图
实验结果显示,与传统的电转法相比,CNP产生的外泌体数量多出50倍以上,外泌体中mRNA转录效率增加了1000倍,在提高产量的同时大大简化了功能性外泌体的产生过程。进一步的研究表明,外泌体产量及转录效率提高的细胞机制比较独特,是通过CNP技术造成的局灶性细胞膜损伤和局部加热导致HSPs上调和细胞内Ca2+升高【3,4】,进而激活了P53-TSAP6途径【5-8】,导致大量细胞内囊泡的形成,促进外泌体产生和分泌(图2)。
图2 CNP法促进外泌体产生和分泌示意图
在此基础上,团队对外泌体进行功能化修饰,通过在外泌体表面表达的跨膜蛋白CD47的N端(膜外侧)克隆靶向神经胶质瘤的肽(FKESWREARGTRIERG和CREKA)来提高外泌体在U87和GL261胶质瘤细胞的靶向性。基于CNP技术将PTEN和CDX (克隆靶向肽的CD47) 两种质粒转入胶质瘤细胞后得到大量具有靶向性的功能性外泌体(Exo-T),在体外具有增强的细胞摄取以及上调了PTEN蛋白的表达。Exo-T在U87胶质瘤免疫缺陷小鼠模型和具有免疫能力的GL261胶质瘤模型中都具有很好的治疗效果(图3)。
图3 功能性外泌体在脑胶质瘤小鼠治疗中的应用
总体来说,本研究开发了一种新的细胞纳米穿孔技术,利用生物芯片促使细胞大量分泌外泌体,并且简化了外泌体装载内源转录mRNA的方法,一系列研究为外泌体在药物递送方面的应用提供了新的思路及方法,具有理论意义和应用价值。
原文链接:
https://doi.org/10.1038/s41551-019-0485-1
参考文献
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来源:BioGossip BioArt
原文链接:https://mp.weixin.qq.com/s?__biz=MzA3MzQyNjY1MQ==&mid=2652479234&idx=6&sn=93e28d6a5dc60c028d870e84439cd1c8&chksm=84e20cb6b39585a079ebe619d72aed079bfd18838073243e08b0a96c2099745a871c0285cb89#rd
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