程溪柳/刘君/库丽霞合作开发TEAseq技术,用于高通量测序鉴定玉米转座子插入突变体库

科技工作者之家 2021-08-07

突变体是植物功能基因组学研究的基础材料,转座子作为一类可移动的DNA元件,在植物突变体库的构建中被广泛应用。为了更好地对突变体进行研究,需要对其插入位点进行精准鉴定。传统的TAIL-PCR、探针捕获测序等转座子插入鉴定方法普遍存在操作繁琐、价格昂贵等缺点,难以胜任大规模突变体库的快速鉴定工作。如何开发高通量、低成本的鉴定技术成为转座子插入突变体库中亟待解决的问题。

2021年8月5日,中国农业科学院作物科学研究所程溪柳助理研究员、刘君研究员与河南农业大学库丽霞教授合作在Journal of Genetics and Genomics  (JGG) 在线发表了题为TEAseq-based identification of 35,696 Dissociation insertional mutations facilitates functional genomic studies in maize的研究论文。该研究开发了一种高通量鉴定玉米Ds转座子插入突变体库的建库测序和分析方法——TEAseq技术,并鉴定了1,606个玉米突变体,为促进功能研究提供方法学创新和新资源。

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该研究使用转座子末端特异扩增的方法,结合自主开发的多barcode PCR-free混池建库技术,实现了在一个文库中对384个样品的转座子侧翼序列进行同时测序。结合配套的生物信息学分析流程,可以实现对转座子插入突变体的快速准确鉴定。研究完成了1,606个Ds插入突变体的鉴定工作,共鉴定到35,696个非重复的Ds插入位点,覆盖了约四分之一的玉米基因。该研究开发的TEAseq转座子鉴定技术也可以用于其它插入型突变体库的鉴定。该玉米Ds插入突变体库的鉴定为玉米功能基因组学研究提供了重要的材料资源,相关突变体的查询和分享网站见:

http://www.maizetepolymorphism.com/AcDs/

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TEAseq建库原理和流程示意图

中国农业科学院作物科学研究所博士研究生吕明杰、河南农业大学博士研究生柳华峰和中国农业科学院生物技术研究所博士研究生Joram Kiriga Waititu为该论文的共同第一作者。程溪柳助理研究员、刘君研究员和库丽霞教授为该论文的共同通讯作者。相关工作得到科技部十三五重点研发,国家自然科学基金等资助。

论文链接:

https://doi.org/10.1016/j.jgg.2021.07.010

来源: BioArt植物

原文链接:http://mp.weixin.qq.com/s?__biz=MzU3ODY3MDM0NA==&mid=2247509344&idx=2&sn=e877833e1829e466550e13b5559b1d90

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DNA pcr 突变体

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